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大鼠A（CsA）ELISA試劑盒操作流程

時間：2017/3/9閱讀：1004

GSK Elisa Kit實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 大鼠A（CsA）ELISA試劑盒加樣：分別設(shè)空白孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔加待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液
100μl（取1μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃，60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，GSK Elisa Kit每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見孔內(nèi)有明顯藍色，即可終止）。
5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
注：1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標板或者試劑，大鼠A（CsA）ELISA試劑盒請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液。
5. GSK Elisa Kit建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。

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