人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清，血漿及其它相關液體樣本中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)含量。
實驗原理
本試劑盒應用間接法測定標本中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)水平。用純化的人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)標準品和未知濃度的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)待檢樣品，溫育后，加入*標記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)濃度。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 9 | 標準品S1（800pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 標準品S2（600pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 標準品S3（300pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
4 | *標記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 標準品S4（150pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 標準品S5（75pg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1個 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3張 |
8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 12 | 說明書 | 1份 |
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
操作步驟
- 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
- 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl，在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復4次，拍干。
- 加*標記的抗-IgG抗體：每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
- 洗滌：操作同4。
- 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
- 洗滌：操作同4。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
- 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
- 如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
- 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
線形范圍：
30pg/ml-1000pg/ml
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
