殘留溶劑檢查方法——頂空進樣
閱讀：322發(fā)布時間：2022-10-17
原料藥或制劑中有機溶劑的殘留量一般要求控制在幾個至幾千個ppm之間，屬于微量或痕量測定，與常量測定有著不同的特點。
殘留溶劑檢查方法的選擇對測定結果有著重要的影響，有時采用不同的方法測定同一個樣品會得到截然不同的結果。通過對zui近一段申報資料的審評，經常發(fā)現(xiàn)在殘留溶劑的檢查方法尚不合理的情況下，若樣品的色譜圖中未出現(xiàn)溶劑峰，也未經其它系統(tǒng)驗證，研究者就簡單地作出樣品無該溶劑殘留的結論，進而不將其殘留定入質量標準，藥檢所也不再進行復核。針對這種情況，從審評的角度出發(fā)，就如何評價殘留溶劑檢查方法的合理性談自己的一些認識，與各位業(yè)內同仁交流。有機殘留溶劑檢查一般采用氣相色譜法，評價色譜系統(tǒng)的適用性和方法學驗證資料遵循與液相色譜方法評價相同的原則，不再贅述。
與液相方法不同的是，氣相色譜有多種進樣方式，殘留溶劑檢查常用直接進樣法或頂空進樣法。針對這兩種進樣方法不同的特點，評價方法合理性的要點應有所不同。對于直接進樣法，應著重評價方法的靈敏度和重復性。目前已普遍用毛細管柱取代填充柱，因為毛細管柱的柱效高，其靈敏度也較填充柱大為提高。但由于毛細管柱直接進樣的體積小，一般僅幾微升，即使提高供試溶液的濃度，對于測定極低的溶劑（如：苯、、1，2-二氯乙烷等）及對FID檢測器響應低的溶劑（如：含氯的溶劑），其檢測限一般接近或高于，靈敏度難以滿足測定的需要。測定此類溶劑采用頂空進樣法，對含鹵素的溶劑可改用電子捕獲檢測器（ECD）。進樣量小也易造成進樣重復性差，采用內標法較外標法的結果更為準確。頂空進樣法是將大量樣品中的殘留溶劑富集在頂空瓶上層的氣體中，對絕大多數(shù)有機溶劑而言，靈敏度較直接進樣法大為提高，但頂空進樣系統(tǒng)中存在氣液兩相的平衡問題，對結果準確性的影響因素增多。
評價頂空進樣方法是否合理，應著重關注以下三個方面：
（1）頂空進樣條件：頂空瓶的平衡溫度和時間是zui重要的參數(shù)，根據(jù)溶解樣品的溶劑和待測溶劑的不同性質，達到氣液平衡所需的溫度和時間可能不同，應有試驗數(shù)據(jù)作為選擇的依據(jù)，但在申報資料中一般都未提及。判斷頂空條件是否適用，一般的規(guī)律是：頂空瓶的平衡溫度應低于溶解樣品所用溶劑的沸點10℃以下，能滿足檢測靈敏度即可；對于沸點過高的溶劑，如DMF、DMSO、聚乙二醇等，用頂空進樣測定的靈敏度不如直接進樣，不適宜采用頂空法；頂空瓶的平衡時間一般應為30至60分鐘，才能保證氣液兩相達到穩(wěn)態(tài)平衡。
（2）供試品和對照品是否平行：由于供試品和對照品的液體部分狀態(tài)不*一致而造成的基質效應會直接影響到結果的準確性。采用標準加入法可以消除基質效應，但目前在國內的申報資料中較少見到，其原因可能是方法較為繁瑣，且需要消耗大量的樣品，對新藥研發(fā)初期樣品量較少的情況或一些貴重的藥品不太適用。如果申報資料中提供了回收率數(shù)據(jù)，就容易判斷基質效應的大小，但由于目前對此沒有強制要求，大多數(shù)資料都未對回收率進行研究。因此在評價方法時，至少應要求對照品和供試品采用相同的溶劑溶解，且液體部分的體積應*一致。（3）重復性：由于頂空進樣法存在氣液平衡和氣體進樣的問題，粗放度較大，中國藥典2005年版的要求是：內標法連續(xù)五次進樣的相對標準偏差小于5％，外標法的相對標準偏差小于10％；歐洲藥典則要求相對標準偏差小于15％，因此重復性應密切關注。此外，無論是直接進樣或頂空進樣，都應盡量使供試液中的樣品*溶解，否則當殘留溶劑被包裹在樣品晶格中時就不能被檢測出來，可能造成結果與實際情況*不符。對溶解性差的樣品，可采用不揮發(fā)性酸或堿的溶液、高沸點的有機溶劑、混合溶劑等來溶解樣品，即使樣品在加熱的條件下可能被破壞，只要待測的殘留溶劑不被破壞（如：測定酯類溶劑不能采用酸或堿溶液，以免發(fā)生分解）且樣品的熱分解產物不影響測定，那么方法也是可以認可的。如果確實有一些藥物采用上述條件都不能達到溶解，則可考慮采用充分研磨或超聲的方法破壞藥物的結構，使其中的殘留有機溶劑釋放出來，當然，這種情況下一般應注意進行相應的方法學驗證以確定方法的可行性。在國外藥典中，對殘留溶劑檢查的規(guī)定有所不同，其中以歐洲藥典對殘溶檢查的要求zui為嚴格，它建立了兩個極性不同的色譜系統(tǒng)，對色譜系統(tǒng)的選擇、色譜條件、溶液的配制方法、系統(tǒng)適用性試驗、方法學驗證等都作了詳細的規(guī)定，以保證樣品中所有的殘留溶劑都能被逐一的、準確的檢測出來，避免發(fā)生遺漏的情況；根據(jù)樣品的具體情況選用其中一個系統(tǒng)測定后，還必須用另一系統(tǒng)加以驗證，以保證結果的正確性。歐洲藥典的殘溶檢查方法看似繁瑣、呆板，但在其嚴謹、嚴格的框架下，結果的可信度、準確度、專屬性、耐用性大大提高，值得我們研發(fā)者和評價者共同借鑒。
