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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：1467發(fā)布時間：2011-4-27
細(xì)胞培養(yǎng)的條件和要求
1.所有與細(xì)胞接觸的設(shè)備、器材和溶液等，都必須保持無菌，避免細(xì)胞外微生物的污染。
目前zui可靠和zui常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。
如：玻璃制品、布類、金屬制品：6.8kg20min。
橡膠制品：3.6～4.5kg10min。
培養(yǎng)用液，如Hanks液，水解乳蛋白：3.6～ 4.5kg10min。
實(shí)驗(yàn)中染菌物品和動物尸體等：6.8 kg20min。
試管、吸管等，則可采用干熱滅菌；
一切不適于加熱滅菌的液體，如人工合成培養(yǎng)液、小牛血清、*等溶液，可采用過濾法除菌。
細(xì)胞培養(yǎng)中常用的消毒劑濃度及其使用場合
2.必須有足夠的營養(yǎng)供應(yīng)，而不可有有害的物質(zhì)，包括極微量的有害離子的摻入，為此必須注意器材的清洗和配液用水的質(zhì)量。
細(xì)胞培養(yǎng)中對水的質(zhì)量要求很高（見水處理）。
3.保證有適量的氧氣供應(yīng)。
細(xì)胞代謝需要有空氣，否則細(xì)胞死亡。在用培養(yǎng)瓶進(jìn)行靜止培養(yǎng)，或用轉(zhuǎn)瓶進(jìn)行旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時，只要培養(yǎng)的液體量不超過總?cè)萘康?0％，通過與液面的空氣交換，可以保證細(xì)胞有足夠的氧氣。當(dāng)用罐子深層培養(yǎng)時，則必須通氣，一般采用含5％CO2的空氣，或根據(jù)需要將CO2、N2、O2和空氣以不同比例混合，過量氧對細(xì)胞的生長也不利。
4.需隨時清除細(xì)胞代謝中產(chǎn)生的有害產(chǎn)物。
細(xì)胞在代謝過程中會產(chǎn)生大量代謝廢物，如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等，這些產(chǎn)物對細(xì)胞的生存有害，必須及時清除。在小量培養(yǎng)時，當(dāng)培養(yǎng)基中酚紅指示劑顯示黃色，表示已有相當(dāng)量乳酸產(chǎn)生，要及時更換新鮮的培養(yǎng)基。在大量培養(yǎng)時，則需隨時測定葡萄糖和乳酸等含量，并調(diào)節(jié)灌流速度，使代謝產(chǎn)物保持在無害水平下。
5.有良好的適于其生存的外界環(huán)境，包括溫度、pH、滲透壓和離子濃度等。
不同的細(xì)胞對pH的要求不同，一般來說適于細(xì)胞生長的pH在6.8～7.4，過高或過低均不利于細(xì)胞生長。如上所述，細(xì)胞在代謝過程中會產(chǎn)生大量乳酸，使培養(yǎng)的pH下降。為了保持培養(yǎng)液的pH，常在培養(yǎng)液內(nèi)加入各種緩沖系統(tǒng)，如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3（CO2）、Tricineglycine，以及加緩沖劑Hepes液（常用濃度為10～50mol/L）.
6.及時分種，保持合適的細(xì)胞密度
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