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所在地區(qū):上海上海市

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技術(shù)文章

上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

閱讀:424發(fā)布時間:2011-5-11

www.niunang.cn/st32881/product_712331.html上皮細(xì)胞的培養(yǎng):

上皮細(xì)胞培養(yǎng)

1)表皮細(xì)胞培養(yǎng)

1.取材:取外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊,以角化層薄者為佳,早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮

膚更好,切成0.51平方厘米小塊。

2EDTA處理:先置入0.02EDTA中室溫置5分鐘。

3.冷消化:換入0.25%*中,置4過夜。

4.分離:取出皮膚,用*或鑷子把表皮與層分開。

5.溫消化:取出表皮單獨(dú)處理,用剪刀剪成更小的塊后,置入新的0.25%胰蛋

白酶中,37再消化3060分鐘。

6.用吸管輕輕反復(fù)吹打,使成細(xì)胞懸液。

7.培養(yǎng)液:通過80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過后,低速離心,吸上清,直接加入Eagle

液和20%小牛血清,制成細(xì)胞懸液,接種入碟皿中,CO溫箱培養(yǎng)。2

2) 乳腺組織培養(yǎng)

 直接培養(yǎng)法:(適于培養(yǎng)含纖維少的軟組織)

1.在含有少量培養(yǎng)液或Hanks液的容器中,用鋒利刀片將組織反復(fù)切割成碎塊。

2.把組織碎塊連同液體注入離心管中,再補(bǔ)加少許培養(yǎng)液,用吸管吹打片刻,

置試管架35分鐘。吸除上層液可排除非乳腺細(xì)胞部分。重復(fù)23次。

3.末次處理結(jié)束后,向沉降管中再補(bǔ)加培養(yǎng)液,用吸管稍吹打,使沉降物重懸。

不待細(xì)胞團(tuán)塊下降立即通過34層無菌紗布濾入另管中。

4.調(diào)整好適宜密度,接種入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

膠原酶消化法:(適于處理含纖維多的較硬組織)


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