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上海酶聯(lián)生物研究所
上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：436發(fā)布時間：2011-11-3
一、實驗?zāi)康?
掌握剖離果蠅幼蟲唾液腺的技術(shù)以及制作唾腺染色體玻片標(biāo)本的方法；觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征；了解體細胞染色體聯(lián)會現(xiàn)象。
二、實驗原理
雙翅目昆蟲的幼蟲發(fā)育到一定時期后，唾液腺細胞數(shù)不再增加，僅增長細胞大小，而核內(nèi)染色體卻連續(xù)復(fù)制，著絲粒不分離，形成由上千條螺旋狀的染色線構(gòu)成的多線染色體。它比普通染色體大得多，寬約5μm，長約400μm，相當(dāng)于普通染色體的100～150倍，因而又稱為巨大染色體。唾腺染色體的同源染色體常處于緊密配對狀態(tài)，稱“體細胞聯(lián)會”，因而鏡下計數(shù)比一般體細胞染色體少一半。不同區(qū)段染色深淺不同，形成了明暗相間、寬窄不一的橫帶，這些橫帶的數(shù)目和位置往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特征。如染色體有缺失、重復(fù)、倒位、易位等，很容易在唾腺染色體上識別出來。
三、實驗材料
黑腹果蠅的三齡幼蟲。
四、實驗器具和藥品試劑
生化培養(yǎng)箱、干燥箱、高壓滅菌鍋、電磁爐、微波爐、銻鍋、雙筒解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、量筒、載玻片、蓋玻片、切片架、切片盒、棉塞、紗布、牛筋、玻棒、燒杯、滴瓶、濾紙。
95%乙醇、無水乙醇、冰醋酸、樹膠、二甲苯、0.7%生理鹽水、改良*品紅染色液。
五、實驗方法和步驟
（一）幼蟲的培養(yǎng)
在實驗前的兩個星期，每一個培養(yǎng)瓶放1～2對果蠅（♀、♂），控制產(chǎn)卵數(shù)量。放在18～20℃條件下飼養(yǎng)，幼蟲才長得肥大，才能獲得較大的唾腺。
（二）取唾腺
從瓶壁或培養(yǎng)基表面挑取一只肥大的三齡幼蟲，先在盛有水
的培養(yǎng)皿中清洗身上的污物，然后把幼蟲放在干凈的載玻片上，并滴一滴0.7%的生理鹽水，在鏡下辨認頭部和尾部。頭部稍尖，并且有一黑點即口器，不時地擺動。用兩根解剖針同時插在口器即黑點的地方，左手或是右手輕緩地向前移動，便可將頭部扯開，唾腺也隨之被拉出。這時可以看到一對透明而微白的長形小囊，即唾腺（圖7-1）。唾腺的側(cè)面常常有一些沫狀的脂肪體附著，可用解剖針剝離去。如果唾腺被拉斷或未被拉出，可用解剖針在頭部或身體處把其擠壓出來。
（三）染色壓片
染色前先將頭部、身體等部位其它雜質(zhì)清理干凈，用一張吸水紙在遠離唾腺的地方，將生理鹽水吸干，滴一滴染色液染色4～7分鐘。蓋上蓋片，將載片放在較平的桌面上，其上覆一張小的吸水紙，右手大拇指對準(zhǔn)腺體的地方用力往下壓（注意，不能讓蓋片滑動），唾腺染色體即被壓展開來。
（四）觀察
壓好的玻片標(biāo)本，先在低倍鏡下檢查，有好的典型細胞，再換成高倍鏡觀察。通過觀察，可以看到在四對染色體中，*對染色體 ?。╔＿）組成一個長條，第二和第三對各自組成了具有左右兩臂的染色體對，它們都以中部的著絲區(qū)聚集，而第四對染色體很小，分布在著絲區(qū)呈點狀（不易觀察到）。這樣，從壓好的較為模式的片子中便可看到五條彎曲展開的染色體臂（X＿、ⅡL、ⅡR、ⅢL、ⅢR），和一個點狀的第四染色體對。
（五）*裝片
唾腺染色體伸展較好的標(biāo)本片，可通過下列步驟做成*裝片。準(zhǔn)備四個大培養(yǎng)皿，*個皿置一短玻棒，倒入固定液150ml，將有蓋片的面朝下，一端搭在玻棒上，在固定液中浸泡到蓋片落下來為準(zhǔn)，然后將載玻片翻轉(zhuǎn)1800，與蓋片一起移到第二個皿處理一分鐘，皿內(nèi)裝120 ml 95%乙醇，然后又移到第三和第四個皿中各處理一分鐘，皿內(nèi)各裝120 ml無水乙醇。從第四個皿中夾出載片和蓋片放到一張濾紙上，待片干之后即可封片。封片時特別注意，樹膠不能過多，只要一小小滴就夠了。
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