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上海通蔚生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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我司代做實(shí)驗(yàn)/細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的基本原理

時(shí)間:2017/6/21閱讀:2075
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細(xì)胞培養(yǎng)是用酶消化法將組織碎塊分離成單個(gè)細(xì)胞,用培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液,在體外適宜條件下,使細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖,并保留其一定的結(jié)構(gòu)和功能特性。細(xì)胞培養(yǎng)與組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)主要不同點(diǎn)在于原始培養(yǎng)的對(duì)象不同。細(xì)胞培養(yǎng)使用的是單個(gè)細(xì)胞懸液,組織培養(yǎng)使用的是組織塊(0.5~1立方毫米)或薄片(厚0.2毫米),而器官培養(yǎng)使用的是器官原基或器官的一部分或整個(gè)器官。
 

在組織培養(yǎng)中,細(xì)胞自組織塊周圍移出并生長(zhǎng),細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中總有移動(dòng)(運(yùn)動(dòng))或其它變動(dòng),這樣就使被培養(yǎng)的組織難以長(zhǎng)期維持其原有的結(jié)構(gòu)和功能。培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng),發(fā)生變化的可能性越大,結(jié)果常使單一類型的細(xì)胞保存下來(lái),zui終成了細(xì)胞培養(yǎng)。在細(xì)胞培養(yǎng)中,細(xì)胞生命活動(dòng)和體內(nèi)細(xì)胞一樣,仍然是相互依存的,呈現(xiàn)一定的組織特異性,所以組織培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)際上無(wú)嚴(yán)格區(qū)別。

 

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生命科學(xué)中常用的研究手段,該方法能排除神經(jīng)體液因素的影響及肝、腎解毒功能的干擾,觀察某些因素或藥物對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的直接作用。通過(guò)實(shí)驗(yàn)可獲得某一類型細(xì)胞的純培養(yǎng)。如心肌組織中心肌細(xì)胞約占50%,非心肌細(xì)胞占50%;而經(jīng)純化分離的心肌細(xì)胞懸液中,心肌細(xì)胞可達(dá)95%以上,這樣,心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本不受其它細(xì)胞的干擾。
 

在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中能直接觀察到培養(yǎng)細(xì)胞生命活動(dòng)的動(dòng)態(tài)過(guò)程;用定時(shí)顯微攝影記錄可發(fā)現(xiàn)一些肉眼觀察不到的生命現(xiàn)象;還可利用電鏡手段、同位素標(biāo)記、放免法和免疫組化法等來(lái)研究細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)的分布。此外,還能節(jié)約研究費(fèi)用。如在某些研究中,用100只動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)所獲得結(jié)論與用100張蓋玻片或幾十個(gè)培養(yǎng)瓶而獲得結(jié)論具有相同的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而細(xì)胞培養(yǎng)較之大批量的動(dòng)物飼養(yǎng)花費(fèi)要小。

 

細(xì)胞培養(yǎng)方法也存在不足之處:培養(yǎng)細(xì)胞失去體內(nèi)細(xì)胞的制約和整體的調(diào)節(jié)作用,細(xì)胞形態(tài)和功能會(huì)發(fā)生一定程度的改變。培養(yǎng)方法、實(shí)驗(yàn)試劑對(duì)細(xì)胞形態(tài)和功能有一定的影響,如胰蛋白酶可破壞細(xì)胞表面受體、酶、抗原等。長(zhǎng)期體外培養(yǎng)的細(xì)胞,由于反復(fù)傳代、凍存和操作等因素的影響,可能發(fā)生染色體非整倍體改變,呈永生化或癌變的特征。

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