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纖維連接蛋白(nbronectin,F(xiàn)n)的測(cè)定

閱讀:859發(fā)布時(shí)間:2011-6-14

纖維連接蛋白(fibronectin,F(xiàn)n)是一組高分子糖蛋白,廣泛存在于細(xì)胞表面、細(xì)胞外液及結(jié)締組織有關(guān)的基底膜上。Fn具有促進(jìn)細(xì)胞粘連,細(xì)胞與纖維、基質(zhì)間的連接;促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能等廣泛生物學(xué)活性;并與機(jī)體創(chuàng)傷組織愈合、組織炎癥、纖維化及硬化過程等密切相關(guān)。因此,F(xiàn)n的含量變化與臨床多種疾病的嚴(yán)重程度和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)。

檢測(cè)Fn的方法常用單向免疫擴(kuò)散法、膠乳凝集法、間接血凝法、激光免疫比濁法以及ELISA法,后者定量較,特介紹如下。

1.試劑 ①Fn的制備:主要流程為將新鮮人血漿流穿空白Sepharose-4B柱一收集含蛋白流穿液*穿明膠Sepharose4B柱一7mol/L尿素解吸(Fnl)*穿抗無Fn的人血清-Sepharose-4B柱(Fn2)*穿抗人IZC-Sepharose-4B柱一Fn3(即純化的h);②Fn McAb制備:用純化Pn 2mg免疫BALB/c小鼠(首劑加福氏*佐劑),以后每間隔10d用同樣劑量追加免疫。細(xì)胞融合前3d加強(qiáng)免疫一次。有關(guān)細(xì)胞融合技術(shù)及McAb提取。

2.操作步驟 取zui適工作濃度的Fn McAb 0.1mL包被微孔反應(yīng)板,4~C過夜,洗滌后加待測(cè)標(biāo)本0.1mL(尿液不稀釋,胸腹水、血清作1:10稀釋),370C 2h;洗滌后再加入zui適工作濃度的HRP標(biāo)記的Fn McAb0.1mL,37~C 2h;洗后加OPD-H20:底物顯色。在酶標(biāo)儀上,讀吸光度值。同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)參考血清繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,算出待測(cè)標(biāo)品中Fn含量。

3.正常參考值與臨床意義 血清Fn含量低于血漿,約為血漿含量的67%。成人血清Fn含量為231±46mg_/L。ELISA檢測(cè)正常人尿中Fn <0.47mS/Lo

血漿(血清) Fn降低見于許多疾病,尤其是在某些危重疾病,若持續(xù)低值則預(yù)后不良,回升者預(yù)后較好。急性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎、重癥肝炎、失代償?shù)母斡不∪恕⒏伟┎∪擞绕涫菑V泛性肝轉(zhuǎn)移者,F(xiàn)n含量顯著降低,可能是由于Fn合成減少,消耗增多之故。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎時(shí)血漿(血清) Fn正常,但病變關(guān)節(jié)液中Fn濃度常數(shù)倍于血漿濃度,提示滑膜受炎癥刺激后Fn的合成增加。

惡性腫瘤腹水Fn值顯著高于肝硬化腹水。結(jié)核、結(jié)締組織病、間皮瘤患者胸液Fn含量明顯高于腫瘤患者。腎病患者尿液中h含量增高,且多為IgA型腎病。
 


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