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技術(shù)文章

*A結(jié)合蛋白（CypA）三類Ig自身抗體的測(cè)定

閱讀：619發(fā)布時(shí)間：2011-6-25

*A結(jié)合蛋白（cyclophilinA，CypA）是生物細(xì)胞胞漿中的一種結(jié)構(gòu)高度保守的低分子量蛋白（18 000），具有肽酰脯酰順反異構(gòu)酶（pplase）活性，在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成、折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起重要作用。因*A（CsA）具有選擇性免疫抑制作用而廣泛用于防治器官移植排斥反應(yīng)，其效應(yīng)的發(fā)揮主要是通過細(xì)胞內(nèi)受體CypA的存在而起作用的。CsA與CypA結(jié)合后，即可影響mRNA的轉(zhuǎn)錄和某些蛋白質(zhì)的表達(dá)，抑制T細(xì)胞的增殖與細(xì)胞因子的分泌。虞偉等利用基因重組技術(shù)，克隆表達(dá)出人CypA產(chǎn)物作為包被抗原，建立了檢測(cè)三類Ig抗體的間接ELISA方法，現(xiàn)將其方法簡(jiǎn)要介紹如下。

操作步驟 將重組人CypA（hcypA）抗原溶于pH9．6的0．05mol／LCBS緩沖液中，調(diào)整濃度至11ug／mL，包被聚苯乙烯反應(yīng)板，100uL／孔，37℃ 1h后洗滌，加入l：50稀釋的待測(cè)血清，同時(shí)沒空白，陰性和陽性對(duì)照孔，43cC40min后洗滌，再分別加入HRP標(biāo)記的抗人γαμ鏈抗體的F（ab’）2，43℃40min，洗后加底物（OPD-H202）溶液，37℃避光顯色5min，用2mol／LH：S04終止反應(yīng)，空白調(diào)零，于492nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度（A）值。
 


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