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DNA合成的基本原理

閱讀:749發(fā)布時間:2011-10-13

DNA合成和純化系統(tǒng)使DNA合成的4個過程(合成、切除、脫保護及純化)自動完成,定量、自動地收集DNA產(chǎn)品。這些過程在3種同時運行的模塊中完成。

DNA合成所需的全部化學步驟都在合成柱內(nèi)進行,合成DNA所需要的全部試劑和溶劑都可以通過試劑運輸系統(tǒng)供給。在柱子(起始載體結(jié)合的核苷是裝在一次性的柱子中,該柱子除柱體外還有兩個固定過濾板和兩個接頭,所有部件都是由惰性材料制成)中發(fā)生3個化學過程。

*個過程發(fā)生在合成模塊中。柱中含有3’端核苷,與載體物質(zhì)共價結(jié)合,一次加1個堿基到載體結(jié)合的核苷上,DNA鏈就開始增長,合成的粗寡核苷酸既可帶5,—DMT基團,也可不帶5,—DMT基團,而純寡核苷酸的合成必須帶5’—DMT基團。

在自動生產(chǎn)寡核苷酸的第二個過程中,柱子被切換到切除模塊,這里濃的氫氧化銨溶液被輸送到柱內(nèi),從載體上切除寡核苷酸,然后將氫氧化銨溶液中的DNA產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到脫保護模塊。

第三個過程是脫保護,將含寡核苷酸的溶液在65℃加熱1h以達到從寡核苷酸上去除掉保護基團的目的。

第四個過程為純化模塊,所希望獲得的全長寡核苷酸與失敗片段及其他雜質(zhì)分離。純化是將混懸在氫氧化銨溶液中脫保護的產(chǎn)物通過原來的柱內(nèi)的載體來完成。DMT化的全長寡核苷酸在柱內(nèi)結(jié)合到載體上,而脫DMT的失敗片段和其他雜質(zhì)都被沖洗去掉。接著經(jīng)脫DMT后,用20%的乙腈水溶液:將DNA產(chǎn)物從柱上洗脫下來。

已純化的寡核苷酸應用UV(紫外線)檢測系統(tǒng),在20%的乙腈溶液中進行定量測定,當樣品輸送到樣品收集模塊時通過檢測器,吸收以光密度單位(ODU)表示,產(chǎn)量則以皮摩爾(pmole)表示。自動合成寡核苷酸是以樣品收集模塊(module)中收集DNA樣品而告完成。
 


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