細(xì)胞標(biāo)本的制備方法有印片法如下。穿刺涂片法、沉淀法及活細(xì)胞標(biāo)本的制備等，現(xiàn)分述：
（一）印片法
常用于手術(shù)切除標(biāo)本。將新鮮標(biāo)本沿病灶中心切開，將蓋玻片壓在病灶上，細(xì)胞即可附肝脾胰腎于載玻片。吹干或自然晾干后立即置于固定液內(nèi)10～15min，取出后自然晾干，低溫保存?zhèn)溆谩?br />印片法操作簡(jiǎn)便，抗原保存好。缺點(diǎn)是有時(shí)細(xì)胞厚薄不均，并且載玻片上組織液較多，可能會(huì)影響標(biāo)記結(jié)果。
（二）穿刺涂片法
常用于體表腫瘤以及肝、腎、肺、后腹膜腫瘤等穿刺。如穿刺液較少，可直接涂于載玻片，注意涂抹均勻；如穿刺液較多，細(xì)胞較豐富，可滴入裝有1—2ml Hanks液（或RP—M11640液）的試管內(nèi)，以500r／min低速離心10～15min，棄上清，吸取1—2滴沉淀物滴在載玻片上，鏡下觀察細(xì)胞排列較密而不重疊為宜，自然晾干后固定。
穿刺法操作簡(jiǎn)便，細(xì)胞形態(tài)保持較好，但細(xì)胞分布不均勻。
（三）沉淀法
主要用于尿液、胸腹水、腦脊液等體液多而細(xì)胞少的標(biāo)本，其制備方法有二種。
1．常規(guī)制備法
根據(jù)標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞量的多少用不同的方法。如果細(xì)胞較多，液體渾濁，可吸取1—2滴直接涂在載玻片上，并注意涂均勻；如果細(xì)胞較少，可吸取瓶底自然沉淀液5ml，1500～2000r／min離心10min后，倒掉上清液，吸取1—2滴沉淀涂在載玻片上。如有細(xì)胞離心涂片器，可將標(biāo)本用上述離心法制成2X105個(gè)細(xì)胞／ml的細(xì)胞懸液，吸取50gl加入涂片器內(nèi)，離心后即制成分布均勻的細(xì)胞玻片。細(xì)胞分布在直徑6mm的小圈內(nèi)，每個(gè)圓圈內(nèi)的細(xì)胞數(shù)約10s個(gè)。
2．單核細(xì)胞分離法
主要用于周圍血或胸腹水中淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記，以鑒別B淋巴細(xì)胞性白血
病、T淋巴細(xì)胞性白血病或惡性淋巴瘤。如為血性胸腹水，標(biāo)本經(jīng)1500r／min離心10min后棄上清，在沉淀中加15ml RPMll640培養(yǎng)液，再用淋巴細(xì)胞分離液分離單核細(xì)胞。在5mlRPMll640培養(yǎng)液內(nèi)于37℃培養(yǎng)30min后，離心沉淀，取上清，制成濃度為2X106個(gè)細(xì)胞／ml的細(xì)胞懸液，吸取50gl滴于載玻片上，略干，固定10min，取出晾干后備用。
3．注意事項(xiàng)
（1）在制備過(guò)程中，因反復(fù)離心洗滌后細(xì)胞黏附性較差，易脫片，因此載玻片應(yīng)預(yù)先涂黏合劑。
（2）為節(jié)省試劑和便于觀察，制片時(shí)細(xì)胞應(yīng)集中在直徑在o．6～1．0cm的圓圈內(nèi)，細(xì)胞總數(shù)以105個(gè)為宜。
（3）富于黏液的標(biāo)本，如痰液、食管拉網(wǎng)、胃液等，未經(jīng)處理時(shí)不宜做免疫組化標(biāo)記。
（四）活細(xì)胞標(biāo)本的制備
活細(xì)胞標(biāo)本一般用于單克隆抗體的篩選、細(xì)胞骨架蛋白的定位研究。標(biāo)本來(lái)源主要是建株細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞、外周血等。細(xì)胞可直接培養(yǎng)在蓋玻片上、培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)或培養(yǎng)板上，也可將一定量的細(xì)胞收集離心進(jìn)行涂片。不管任何形式，在進(jìn)行免疫組化標(biāo)記前均需反復(fù)洗滌，乙醇、丙酮或4％多聚甲醛固定。乙醇、丙酮固定5～15min，4％多聚甲醛固定3～5min?；罴?xì)胞標(biāo)本固定后應(yīng)立即進(jìn)行免疫組化定位。
會(huì)員1.png)