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閱讀:888發(fā)布時(shí)間:2011-12-10
(一)材料與試劑配制
1.DEAE52纖維素
2.0.10Mol/L ZnSO4液
ZnSO4•7H2O 2.88g加水至1 000.00ml
3.飽和硫酸銨溶液
4.10%EDTA—Na
5.SephadexG200
6.0.01Mol/L pH7.4PB液
7.0.10Mol/L pH6.4PB液
8.血清
(二)操作方法
1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,調(diào)pH至7.0,室溫?cái)嚢?h,離心去沉淀。
2.于上清液中加入等量的飽和硫酸銨溶液,混勻后靜置30min或冰箱過(guò)夜。
3.10 000r/min離心10min,去上清。
4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。
5.生理鹽水中透析除鹽。
6.過(guò)DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脫蛋白(IgG)棄去。
7.換用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脫,收集蛋白峰,即為IgA。
8.再過(guò)SephadexG200柱,洗液為0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脫液測(cè)OD280值,取*峰即為純化IgA。
9.透析、濃縮、鑒定。
分泌型IgA的分離與鑒定
(一)材料與試劑
1.初乳
2.SephadexG200
3.0.10Mol/L pH6.8PB液
4.0.01Mol/L pH7.4PB液
5.DEAE52
(二)操作方法
1.取初乳20ml,10 000rpm離心10min,棄去表面脂肪層及底部的沉淀物。
2.取乳清過(guò)SephadexG200柱(柱規(guī)格為2.50cm×90cm),以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脫,*峰為IgA(含IgG)。
3. 收集乳液,于0.01Mol/L pH7.4PB液中透析。
4. 將透析液濃縮至5mg/ml以上。
5. 過(guò)DE52層析柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脫,洗下蛋白峰為IgG,棄去。
6. 換用0.10Mol/L pH6.8PB液或0.01Mol/L pH7.4PBS(0.10Mol/L NaCl)液洗脫,
收集洗脫液 ,即為較純的IgA液。
7. 必要時(shí),可再過(guò)一次SephadexG200柱。
8. 濃縮,鑒定
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