人類補體C2基因位于第6號染色體短臂的HLA區(qū)，與Bf緊密連鎖。C2、Bf、C4共同構成補體單倍型，C2的缺乏可導致一些疾病的發(fā)生。C2的遺傳多態(tài)性主要為C2*C（C：common）、C2*B（B：basic）、C2*A（A：acidic）、C2*QO（QO：Quantify Zero）四種同種異型。
聚丙烯酰胺等電聚焦及溶血覆蓋檢測C2遺傳多態(tài)性
1．原理 等電聚焦是根據(jù)所測蛋白質(zhì)等
電點的不同，將各類蛋白質(zhì)分離開。C2等電點（p1）為5．5，通過等電聚焦電泳，C2條帶可出現(xiàn)在兩性電解質(zhì)pH 5．2～5．7的范圍內(nèi)，繼而加以溶血覆蓋，C2條帶區(qū)可出現(xiàn)透明溶血帶，根據(jù)C2溶血帶出現(xiàn)的區(qū)域，判別C2的同種異型。
2。所需試劑的配制
（1）Acryl sol A：牛磺酸33．30g、丙烯酰胺66．60g、雙丙烯酰胺1．60g，加水至幾，過濾，放棕色瓶，4℃保存。
（2）pH7．3VBS（5X）：*鈉1．019g，NaCl 8．30g，先溶于150mL蒸餾水中，加HCl（1mol／L）3．46mL，zui后加蒸餾水至200mL。
（3）2％明膠：明膠2g，疊氮鈉0．02g溶于100mL蒸餾水中，4℃保存。
（4）GVB2+（明膠*緩沖液）：VBS2+ （5X）20mL，0．03mol／L CaCl2 2mL，0.1mol／LMRCl：2mL，2％明膠10mL，加蒸餾水至100mL。
（5）GL-GVB2=：GVB2+ 1份與10％葡萄糖溶液1份混合。
（6）PB pH6．0，u=0．1：NaH2P04·2H20（MW 156．01）13．17g，Na2HP04·12H20（MW358．16）1．86g，加水至1L。
（7）PBSpH6．0：0．85％NaCl 980mL，PBpH6．0／l：0．1m20mL。
（8）5X 10—5mol／L 12溶液：先配制10-2mol 12溶液：稱取8．3g KI，0．25g 12，加4mLpH6．0,u=0。1的PBS，待I2溶解后，再加PBSl00mL。取10-2mol l2 5mL加PBS 995mL。
（9）0．2mol磷酸：取1．35mL磷酸』口水至100mL。
（10）0．2mol乙醇胺：取乙醇胺1．22mL，加蒸餾水至100mL。
（11）0．001％核黃素：稱取核黃素10mg，加蒸餾水至1L，儲于棕色瓶中，4~C冷藏。
（12）1％曲拉通（冷卻用）：取曲拉通10mL，加蒸餾水990mL。
（13）兩性電解質(zhì)（ampholine，LKB）pH5—8和pH3．5～10兩種。
（14）無C2人血清（R2）的制備：將3份以上正常人血清混合，1:100稀釋的正常人血清，C2將不能發(fā)揮作用。
3．操作步驟
（1）制膠：將Acryl SolA 40raL,0．001％核黃素10．8mL，pH5—8的兩性電解質(zhì)2mL、pH3．5～10的兩性電解質(zhì)0．4mL混合后，倒入15X10cm，厚度為lmm的兩塊玻璃板中（中間夾有l(wèi)mm厚的有機玻璃框，四周用鋏子夾住，不漏水），放日光下或兩只40W日光燈下聚膠2—5m／n，然后揭掉一塊玻璃板。
（2）等電聚焦電泳：①將濾紙裁成寬0，65cm長15cm的紙條，疊成四層作為電極條，再將濾紙裁成寬0．5cm，長1cm的紙條，單層作為加樣條；②將凝膠板放在冷卻循環(huán)槽上，凝膠板與冷卻板之間滴加1％的曲拉通，注意不能有氣泡。然后將電極條分別用0．2m01／L磷酸溶液和0．2mol／L乙醇胺浸濕。正極放置經(jīng)0．2moltL磷酸溶液浸濕的濾紙條，負極放
置經(jīng)0．2mol／L乙醇胺浸濕的濾紙條；③打開冷卻循環(huán)泵（LKB MulfiphorⅡ成套電泳系統(tǒng)），4℃循環(huán)冷卻，將電極壓在電極條上，接通電源100～450V預電泳30rain；④將加樣條貼在凝膠上，每個加樣條加15／~L待測EDTA抗凝血漿或血清，450V電泳30min，取掉加樣條，450V電泳15—18h；⑤電泳完畢，取出凝膠板放5X10—5mol／Lh溶液中浸泡10min取出，然后用溶血覆蓋技術進行鑒定，方法同C4溶血覆蓋，不同的是C4溶血覆蓋用的是R4豚鼠血清，C2溶血覆蓋用的是R2人血清。
