該法是R.Treisman尚未發(fā)表的方法，同時(shí)也是Brinboim和Doly（1979）及Ish-Horowicz和Burke（1981）所用方法的改進(jìn)。該方法對于目前使用的所有大腸菌菌株都卓有成效，并可與隨后的純化步驟，如聚乙二醇沉淀或氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心等，一并聯(lián)合使用。注：括號中給出的體積可適用于未經(jīng)*處理的培養(yǎng)。
試驗(yàn)準(zhǔn)備：
1、 溶液Ｉ：50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl（pH8.0） 10mmol/L EDTA（pH8.0）溶液Ｉ可成批配制，在10 lbf/in2（6.895x104Pa）高壓下蒸氣滅菌15min，貯存于4℃。
2、 溶液Ⅱ: 0.2mol/L NaOH（臨用前用10mol/L貯存液現(xiàn)用現(xiàn)稀釋）1％SDS 蓋緊瓶蓋，緩緩顛倒離心瓶數(shù)次，以充分混勻內(nèi)容物。于室溫放置5-10分鐘。當(dāng)溶液的pH值低于8.0時(shí)，*不能有效工作。防止NaOH接觸空氣中的CO2所以要現(xiàn)用現(xiàn)配。
3、 溶液Ⅲ：5mol/L乙酸鉀 60ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml。所配成的溶液對鉀是3mol/L，對乙酸根是5mol/L。
4、 *溶液: 10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl（pH8.0）。
試驗(yàn)步驟：
1、 將冼過的500ml 培養(yǎng)物的細(xì)菌沉淀物，重懸于10ml（18ml）溶液Ｉ中。
2、 加1ml（2ml）新配制的*溶液。
3、 加20ml（40ml）新配制的溶液Ⅱ。
4、 加15nl（20ml）用冰預(yù)冷的溶液Ⅲ。封住瓶口，搖動離心瓶數(shù)次以混勻內(nèi)容物，此時(shí)應(yīng)不再出現(xiàn)分明的兩個液相。于冰上放置10min，會出現(xiàn)一白色絮狀沉淀。沉淀應(yīng)包括染色體DNA、 高分子量RNA和鉀－SDS－蛋白質(zhì)－膜復(fù)合物。
5、 用SorvallGS3轉(zhuǎn)頭（或與其相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)頭）于4℃以4000rpm離心15min，使轉(zhuǎn)頭自然停止轉(zhuǎn)動。如果細(xì)菌碎片貼壁不緊，則可以5000rpm再度離心20min， 然后盡可能將上清全部轉(zhuǎn)到另一瓶中，棄去殘留在離心管內(nèi)的粘稠狀液體。未能形成致密沉淀塊通常是由于溶液Ⅲ與細(xì)菌裂解物混合不充分。
6、 用4層干酪包布把上清過濾至一250ml離心瓶中，加0.6體積的異丙醇，充分混勻，于室溫放置10min。
7、 用Sorvall GS3轉(zhuǎn)頭（或與其相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)頭）于室溫以500rpm離心15min，回收核酸。鹽也會在4℃離心時(shí)沉淀下來。
8、 小心倒掉上清，敞開瓶口倒置離心瓶使殘余上清液流盡，室溫下用70％乙醇洗滌沉淀。倒出乙醇，并除去附于瓶壁的所有液滴，室溫下將瓶倒置放在紙巾上，使zui后殘余的痕量乙醇揮發(fā)*。
9、 用3ml TE（pH8.0）溶解核酸沉淀。
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