小鼠elisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法
一般來(lái)說(shuō)作直線回歸的話，每次檢測(cè)的R2達(dá)到0.98，即R達(dá)到0.99，否則需要復(fù)測(cè)。
如果需要做幾次檢側(cè)，那么每次的斜率和截距相差不要超過(guò)百分之20，R是相關(guān)系數(shù)，x與y的相關(guān)性。一般用R2表示，更加。R2不是說(shuō)是獨(dú)立的，其值越接近1說(shuō)明其相關(guān)性越大。但是，一般的 R2不能達(dá)到這個(gè)值，0.95也不一定說(shuō)明其相關(guān)性低，還應(yīng)該檢測(cè)相關(guān)顯著差異性，無(wú)顯著差異則說(shuō)明R是可信的。當(dāng)然了，R2也是可信的。
什么是競(jìng)爭(zhēng)性ELISA
競(jìng)爭(zhēng)ELISA基于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合技術(shù)，即樣本中的待測(cè)分子與固定量的標(biāo)記的同樣分子（我們一般用堿性磷酸酶作為標(biāo)記）同時(shí)與固定在孔板上的抗體的同一結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是定量的。
什么是夾心ELISA
夾層ELISA采用對(duì)樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體，然后用第二個(gè)帶標(biāo)記的抗體作檢測(cè)，檢測(cè)抗體對(duì)分析物也是專一的。當(dāng)參照標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是定量的。
一個(gè)微孔板上可做多少個(gè)樣本
這是基于96孔微孔板的測(cè)試。除去陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、本底（空白）和檢測(cè)抗體對(duì)照外，還剩下88孔，可做44個(gè)樣本（每個(gè)樣本做雙份）。
ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般使用專門的曲線擬合工具，如：Curve Expert 1.3
下面以“Curve Exert1.3”軟件為例，繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法如下
1 啟動(dòng)“Curve Expert1.3”
2．X軸輸入所對(duì)應(yīng)的濃度值，Y軸輸入標(biāo)準(zhǔn)品的OD值，如圖：
3．單擊[運(yùn)行] 按鈕，出現(xiàn)如下對(duì)話框
4．單擊[ok]按鈕，出現(xiàn)如下兩個(gè)對(duì)話框，關(guān)閉下面一個(gè)對(duì)話框
5. 在對(duì)話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱，從“1”開(kāi)始依次點(diǎn)擊曲線名稱，在右下角會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)擬合的曲線。
6. 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度*的曲線雙擊，出現(xiàn)如下對(duì)話框：
注意：選擇系數(shù)（即“r”值）的曲線方程來(lái)進(jìn)行運(yùn)算。在下面的對(duì)話框
右上角有“r”值 ，當(dāng)“r”值越接近1擬合度越好
7．按[Ctrl]鍵+[L]鍵，出現(xiàn)如下對(duì)話框：
8．輸入標(biāo)準(zhǔn)的OD值，單擊[Calculate]按紐，即可得到待測(cè)蛋白的實(shí)際含量。（標(biāo)本稀釋了N倍，運(yùn)算出的數(shù)值應(yīng)再成以N）。
9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程，可在步驟6的對(duì)話框空白處右擊，選擇”Information”
10. 得到如下對(duì)話框：點(diǎn)擊“Copy”
在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù)：
會(huì)員1.png)