蛋白印跡膜再生液免疫檢測

商品屬性：

商品介紹：

產品保存：4℃保存，一年有效

產品說明：

蛋白印跡膜再生液，用于免疫印跡中轉移了蛋白后膜的重復利用。在免疫印跡中完成了一抗二抗結合和后續(xù)的化學發(fā)光檢測后，有時還需要檢測表達量相對穩(wěn)定的內參蛋白作為參照，或檢測其它蛋白進行比較。通過使用蛋白印跡膜再生液中特殊成份解離一抗二抗與印跡膜上抗原的結合從而去除一抗二抗，即可非常方便地重新利用同一張膜檢測其它蛋白。與重新跑一個 SDS-PAGE 膠比較，不僅省時省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強。

產品特點:

1.不含有常用的beta-巰基乙醇，室溫下使用，可對同一膜進行 5次以上的免疫印跡檢測.

2.獨的配方，效力強，對蛋白作用溫和。

使用方法：

1.用 TBS-T 將膜洗10分鐘×3次，將膜充分浸泡于適當體積再生液中，搖床震蕩室溫孵育30－60分鐘(孵育時間視具體情況而定，表達量高的蛋白可適當延長時間，表達量低的蛋白可減少時間)。

2.用鑷子取出膜，用 TBS-T洗滌緩沖液快速淋洗膜一次，然后洗膜 5-10分鐘。

3.此時膜上結合的抗體己被洗脫，可重新封閉，進行下一輪抗體孵育。

注意事項：

1.剛從冷凍保存中拿出來會出現(xiàn) SDS的沉淀，建議溫水溶解再使用。

2.建議先檢測表達量較低的目的蛋白，用再生液處理后檢測表達量高的蛋白。

3.本品適用于 NC 膜和 PVDF 膜，推薦使用 PVDF 膜，效果更佳。

步驟和注意事項：?

準備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

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