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更新時(shí)間:2024-07-26 15:48:52瀏覽次數(shù):484次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線規(guī)格 | 5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 組織來(lái)源 | 腦組織 |
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貨號(hào) | CS-X3396 | 細(xì)胞形態(tài) | 雙極、多極形 |
細(xì)胞保存方法:
(一)細(xì)胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)液,用PBS清洗。
3. 去除PBS,加入適量(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);
4. 離心1000rpm,5min;
5. 去除,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱,凍存時(shí)間及操作者;
8. 凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/ min;當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí),可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時(shí),則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
產(chǎn)品信息:
貨號(hào) | CS-X3396 | 組織來(lái)源 | 腦組織 |
傳代特性 | 不傳代,不增值,存活1-2周 | 培養(yǎng)基 | 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 |
細(xì)胞形態(tài) | 雙極、多極形 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
培養(yǎng)條件 | 換液頻率 | 每2天半量換液1次 |
商品介紹:
產(chǎn)品名稱:小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織;大腦分左右兩個(gè)半球,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標(biāo)本中,少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是,細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程,其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限,因此,其分類是相對(duì)的。這三型分別為:Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A(pre-O2A progenitor cell)。細(xì)胞呈圓形,表面光滑,直徑約3μm,體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面,具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力,表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起,極少數(shù)為單極突起,直徑約7μm,有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞,既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,O2A)。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷GD3和GQ(淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體),故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力,為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4~5條較粗大突起,表面還殘留有A2B5標(biāo)記物,同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原,無(wú)形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng),大量表達(dá)半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,GC)、蛋白脂蛋白(proteio lipid protein,PLP)、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)等,有對(duì)軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(簡(jiǎn)稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞)包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞,前兩者具有增殖能力。 5.方法簡(jiǎn)介: 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用yi蛋白酶消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2天半量換液1次 生長(zhǎng)特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 雙極、多極形 傳代特性 不傳代,不增值,存活1-2周 消化液 0.25%yi蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% |
操作步驟:
1)、冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期。
2)、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
3)、離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0. 1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
4)、取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動(dòng)試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1)、欲冷凍保存之細(xì)胞應(yīng)在生長(zhǎng)良好且存活率高之狀態(tài),約為80~90%致密度。冷凍前檢測(cè)細(xì)胞是否仍保有其性質(zhì),應(yīng)在冷凍保存前一至二日測(cè)試是否有抗體之產(chǎn)生。
2)、細(xì)胞在液氮中可長(zhǎng)期凍存無(wú),而不會(huì)影響細(xì)胞活力;在-70度可保存數(shù)月。
3)、注意冷凍保護(hù)劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),無(wú)菌且無(wú)色(以0. 22micron FGLP Telflon過(guò)濾或是直接購(gòu)買無(wú)菌產(chǎn)品,如Sigma D-2650),以5~10 ml小體積分裝,4 ℃避光保存,勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級(jí)等級(jí),以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長(zhǎng)期儲(chǔ)存后對(duì)細(xì)胞會(huì)有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液,可避免DMSO直接加入時(shí)釋放的熱量對(duì)細(xì)胞的損傷。緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液是使細(xì)胞逐步適應(yīng)高滲,可降低細(xì)胞受損。DMSO可能引起部分白血病細(xì)胞株的分化,可換用10%甘油凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品:
3T6-Swiss albino (小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) | 人層粘連蛋白-5(LN-5)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 | 人堿性胎兒蛋白(BFP)檢測(cè)試劑盒 |
大鼠脂肪細(xì)胞 | 人γ-谷氨酰環(huán)化轉(zhuǎn)移mei(GGCT)檢測(cè)試劑盒 |
大鼠直腸平滑肌細(xì)胞 | 人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)檢測(cè)試劑盒 |
大鼠終板軟骨細(xì)胞 | 極細(xì)密螺旋體PCR試劑盒 |
大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 腸道病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE核suan檢測(cè)試劑盒 |
大鼠主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞 | 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)核suan檢測(cè)試劑盒(RT-PCR) |
大鼠椎間盤髓核細(xì)胞 | 米曲霉通用型PCR試劑盒 |
大鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞 | 諾如病毒G4型RT-PCR試劑盒 |
大鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞 | 牛腺病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 |
大鼠子宮頸上皮細(xì)胞 | 綿羊皰疹病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
大鼠子宮成纖維細(xì)胞 | 小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞蜜蜂球囊菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
大鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞 | 牛細(xì)小病毒(BPV)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
大鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞 | H-H-H與新城疫病毒(NDV)四重核suan檢測(cè)試劑盒 |
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