人環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）Elisa試劑盒說明書

人環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）Elisa試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:96T     1.5 ng/ml - 48 ng/ml

使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）含量。

實驗原理:人環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）水平。用純化的人環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入環(huán)磷酸鳥苷（cGMP），再與HRP 標(biāo)記的環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）濃度。

組成:

1.30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶7 終止液 6ml×1瓶;

2.酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（96 ng/ml）0.5ml×1瓶;

3.酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶;

4.樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10  說明書1份;

5.顯色劑A液 6ml×1 瓶 11 封板膜2張;

6.顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋1個;

標(biāo)本要求:

1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能

馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟:

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

48 ng/ml 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;

24 ng/ml 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;

12 ng/ml 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;

6 ng/ml 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;

3 ng/ml 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育:操作同3。

8.洗滌:操作同5。

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘。

10.終止:每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定:以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項:

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:2-8℃。

2.有效期:6個月。