大鼠白介素17（IL-17）使用說明書 

大鼠白介素17（IL-17）僅供研究使用。 

檢測范圍:96T     0-20 ng/L 

使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素17（IL-17）含量。 

實(shí)驗(yàn)原理 :本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠白介素 17（IL-17）水平。用純化的大鼠白介素 17（IL-17）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素17（IL-17），再與 HRP 標(biāo)記的白介素 17（IL-17）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素 17（IL-17）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠白介素17（IL-17）濃度。   

大鼠白介素17（IL-17）的組成:  

1 30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶 

2 酶標(biāo)試劑  6ml×1瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（40ng/L）  0.5ml×1 瓶 

3 酶標(biāo)包被板  12 孔×8條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶 

4 樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份 

5 顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張     

6 顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè) 

標(biāo)本要求:   

1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 

操作步驟 :

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 

20 ng/L  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 

10 ng/L  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 

5 ng/L  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 

2.5 ng/L  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 

1.25 ng/L  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 

2.加樣:分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。       

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 

5.洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 

6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。   

7.溫育:操作同3。 

8.洗滌:操作同5。 

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。 

10.終止:每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 

11.測定:以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 

操作程序總結(jié):計(jì)算, 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。   

注意事項(xiàng): 

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。 

4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。 

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 

6.底物請避光保存。 

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 

9.本試劑不同批號組分不得混用。 

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。 

保存條件及有效期: 

1.試劑盒保存:2-8℃。 

2.有效期:6個(gè)月