人巨噬細胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）ELISA試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷

人（Human）巨噬細胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）ELISA檢測試劑盒使用說明書

檢測原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被巨噬細胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的巨噬細胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法:

1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品:

1.37℃恒溫箱

2.酶標儀（450nm）

3.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

操作注意事項:

1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，zui終結果乘以5才是樣本實際濃度。

4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻。

人巨噬細胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）ELISA試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無

標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無

樣本稀釋液6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液6mL 3mL 無

封板膜2 張2 張無

說明書1 份1 份無

自封袋1 個1 個無

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、30、60、120、240、480 pg/mL

試劑的準備:20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1:20稀釋，即1份的20×洗滌緩

沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法:

1.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

2.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

操作步驟:

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5 次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min 內，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。

結果判斷:繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能:

1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R 值，大于等于0.9900。

2.靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6個月