下列各類培養(yǎng)基常用于測定細(xì)菌的糖類代謝試驗、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗、碳源和氮源利用試驗等生化反應(yīng)。

    1.糖、醇發(fā)酵培養(yǎng)基

    （1）成分

    基礎(chǔ)液

    蛋白胨                           10g

    氯化鈉                            5g

    0.5%酸性品紅指示液              10ml

    （或0.4%溴*藍(lán)指示液）  （6ml）

    水                            1000ml

    糖、醇類     每100ml基礎(chǔ)液內(nèi)各加0.5g

    （2）制法  取蛋白胨和氯化鈉加入水中，微溫使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入指示液混勻。每100ml分別加入1種糖、醇或糖苷，混勻后分裝于小管中（若需觀察產(chǎn)氣反應(yīng)，在小管內(nèi)另放置杜漢小倒管）。于116℃滅菌15分鐘。

    常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纖維二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、*、衛(wèi)矛醇、*、肌醇、甘油、水楊素、七葉苷等。

    （3）用途  鑒別各種細(xì)菌對糖類的發(fā)酵生化反應(yīng)，發(fā)酵者產(chǎn)酸，培養(yǎng)基變色（加酸性品紅者由無色至紅色或再至黃色；加溴*藍(lán)者由藍(lán)色至黃色）；產(chǎn)氣時，小倒管內(nèi)有小氣泡。

    2.七葉苷培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨         5g   七葉苷             3g     

    *     1g   水             1000ml      

    枸櫞酸鐵      0.5g

    （2）制法  除七葉苷外，取上述成分混合，微溫使溶解，加入七葉苷混勻，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1,分裝于試管中，121℃滅菌15分鐘。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌對七葉苷的水解試驗，產(chǎn)生棕黑色沉淀為陽性反應(yīng)。

    3.磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨     7g      葡萄糖   5g

    * 3.8g       水     1000ml

    （2）制法  取上述成分混合，微溫使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌的甲基紅試驗（M-R反應(yīng)）和乙酰甲基甲醇試驗（V-P反應(yīng)）。

    ①甲基紅試驗（M-R反應(yīng)）  取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)2~5天，于培養(yǎng)管內(nèi)加入甲基紅指示液（稱取甲基紅0.1g，加95%乙醇300ml,使溶解后，加水至500ml）數(shù)滴，立即觀察，呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈黃色為陰性。

    ②乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P反應(yīng)）  取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)48小時，量取2ml培養(yǎng)液，加入萘酚乙醇試液（稱取α-萘酚5g，加無水乙醇溶解使成100ml）1ml，混勻，再加40%氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，立刻或數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，即為陽性反應(yīng)；無紅色反應(yīng)為陰性，如為陰性反應(yīng)，置35℃水浴4小時后再觀察。

    4.蛋白胨水培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨     10g     水    1000ml 

    氯化鈉      5g

    （2）制法  取上述成分混合，微溫使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管，121℃滅菌15分鐘。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌能否分解*而產(chǎn)生靛基質(zhì)的生化反應(yīng)。

    ①靛基質(zhì)試驗  取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)24~48小時，必要時培養(yǎng)4~5天，沿管壁加入靛基質(zhì)試液數(shù)滴，液面呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。

    ②靛基質(zhì)試液  稱取對二甲氨基苯甲醛5g，加入戊醇（或異戊醇）75ml，充分振搖，使*溶解后，再取鹽酸25ml徐徐滴人，邊加邊振搖，以免驟熱導(dǎo)致溶液色澤變深?；蚍Q取對二甲氨基苯甲醛1g，加入95%乙醇95ml，充分振搖，使*溶解后，再取鹽酸20ml徐徐滴入。

    5.三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨            20g      *         0.2g

    牛肉浸出粉         5g     *       0.2g

    乳糖            10g     0.2%酚磺酞指示液  12.5ml

    蔗糖            10g     瓊脂           12~15g

    葡萄糖           1g     水             1000ml

    氯化鈉           5g

    （2）制法  除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0,1，加入瓊脂，加熱溶脹后，再加入其余成分，搖勻，分裝，121℃滅菌15分鐘，制成高底層（2~3cm）短斜面。

    （3）用途  用于初步鑒別腸桿菌科細(xì)菌對糖類的發(fā)酵反應(yīng)和產(chǎn)生硫化氫試驗。

    方法和結(jié)果觀察：取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，做高層穿剌和斜面劃線接種，置35℃培養(yǎng)24~48小時，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基底層變黃色為葡萄糖發(fā)酵陽性，斜面層變黃色為乳糖、蔗糖發(fā)酵陽性；底層或整個培養(yǎng)基呈黑色表示產(chǎn)生硫化氫。

    6.克氏雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨 20g    枸櫞酸鐵            0.3g  

    牛肉浸粉  3g    *          0.3g

    酵母浸粉  3g    0.2%酚磺酞指示液    12.5ml

    乳糖   10g    瓊脂              12~15g

    葡萄糖  1g    水                1000ml

    氯化鈉  5g

    （2）制法  除乳糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入瓊脂，加熱溶脹后，再加入其余成分，搖勻，分裝，121℃滅菌15分鐘，制成髙底層（2~3cm）短斜面。

    （3）用途  用于初步鑒別腸桿菌科細(xì)菌對糖類的發(fā)酵反應(yīng)和產(chǎn)生硫化氫試驗。

    方法和結(jié)果觀察：取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，做髙層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養(yǎng)24~48小時，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基底層變黃色為葡萄糖發(fā)酵陽性，斜面層呈黃色為乳糖發(fā)酵陽性，斜面層呈紅色為乳糖發(fā)酵陰性；底層或整個培養(yǎng)基呈黑色表示產(chǎn)生硫化氫。

    7.脲（尿素）培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨         1g 0.2%酚紅溶液    6ml

    葡萄糖         1g 20%無菌脲溶液  100ml

    氯化鈉         5g 水           1000ml

    *     2g

    （2）制法  除脲溶液外，取上述成分，混合，調(diào)pH值使滅菌后為6.9±0.1，混勻后，121℃滅菌15分鐘，冷至50~55℃，加入無菌脲溶液（經(jīng)膜除菌過濾），混勻，分裝于滅菌試管中。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌的尿素酶反應(yīng)。

    方法和結(jié)果觀察：取可疑菌落或少量斜面培養(yǎng)物接種于培養(yǎng)基內(nèi)，置35℃培養(yǎng)24小時，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基變?yōu)榧t色為尿素酶反應(yīng)陽性；不變色為陰性，陰性者需延長觀察至1周。

    8.苯*瓊脂培養(yǎng)基

    （1）成分

    *                 1g  氯化鈉     5g

    酵母浸膏                   3g  瓊脂     12~15g

    DL-苯*（DL-phenylalanine） 2g  水       1000ml

    （或L-苯*）            （1g）

    （2）制法  除瓊脂外，取各成分溶于水，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1，再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝試管，121℃滅菌15分鐘，制成長斜面。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌的苯*脫氨酶試驗（也稱苯丙酮酸試驗）。

    方法和結(jié)果觀察：取斜面培養(yǎng)物，大量接種于苯*瓊脂斜面，置35℃培養(yǎng)4小時或18~24小時，取4~5滴10%三氯化鐵溶液試劑，由斜面上部流下，若出現(xiàn)墨綠色，即為苯*脫氨酶試驗陽性；倘若不變色則為陰性。

    9.氨基酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基

    （1）成分

    ①基礎(chǔ)液

    蛋白胨   5g    1.6%溴甲酚紫指示液    1ml

    酵母浸出粉 3g    水             1000ml

    葡萄糖   1g

    ②氨基酸

    L-賴氨酸 0.5g（需加堿溶液溶解）

    L-* 0.5g（需加堿溶液溶解）

    L-* 0.5g（不需加堿溶液溶解）

    （2）制法  先配制基礎(chǔ)液備用；將溶解后的3種氨基酸，各分別加至100ml基礎(chǔ)液（使氨基酸的終濃度為0.5%），混勻，調(diào)pH值使滅菌后為6.8。分裝于小試管中，每管2.5ml并滴加1層液體石蠟；同時分裝一部分基礎(chǔ)液于小試管，作為對照培養(yǎng)基，均置116℃滅菌10分鐘。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌的脫羧酶、雙水解酶試驗。

    方法和結(jié)果觀察：取疑似菌斜面培養(yǎng)物分別接種于上述3種培養(yǎng)基及基礎(chǔ)液對照培養(yǎng)基，置35℃培養(yǎng)24~48小時。在培養(yǎng)初期由于待檢細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，試驗培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基應(yīng)呈黃色，繼續(xù)培養(yǎng)時，試驗培養(yǎng)基如呈紫色或紫紅色，即為陽性反應(yīng)；如至培養(yǎng)末期，培養(yǎng)基仍同對照管呈黃色，則判為陰性反應(yīng)。

    10.明膠培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨   5g 明膠     120g

    牛肉浸出粉 3g 水     1000ml

    （2）制法  取上述成分加入水中，浸泡約20分鐘，加熱溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘。

    （3）用途  用于細(xì)菌的明膠液化試驗。

    方法和結(jié)果觀察：取少量待檢菌斜面培養(yǎng)物穿刺接種于明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置35℃培養(yǎng)24小時，取出置冰箱內(nèi)10~20分鐘。如培養(yǎng)基仍呈溶液狀，則為陽性；培養(yǎng)基重新凝固，則為陰性。細(xì)菌液化明膠之作用有時甚為緩慢，如未見液化，需繼續(xù)培養(yǎng)1~2周方可確定陰性。

    11.丙二酸鈉培養(yǎng)基

    （1）成分

    酵母浸出粉    1g 磷酸二氫鉀               0.4g

    氯化鈉      2g 丙二酸鈉                 3g

    葡萄糖   0.25g 0.4%溴*藍(lán)指示液     6ml

    硫酸銨      2g 水                   1000ml

    *  0.6g

    （2）制法  除指示液外，將上述成分溶解，調(diào)pH值使滅菌后為6.8，再加入指示液。分裝小管中，121℃滅菌15分鐘。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌能否利用丙二酸鈉作為碳源而生長繁殖。

    方法和結(jié)果觀察：取斜面或肉湯培養(yǎng)物接種于丙二酸鈉培養(yǎng)基內(nèi)，置35℃培養(yǎng)48小時。于24小時和48小時后各觀察1次結(jié)果。培養(yǎng)基顏色由綠色變成藍(lán)色為陽性反應(yīng)；無顏色變化，或由綠色變成黃色，則為陰性反應(yīng)。

    12.枸櫞酸鹽培養(yǎng)基

    （1）成分

    氯化鈉       5g *（無水）           2g

    *       0.2g 1.0%溴*藍(lán)指示液   10ml

    *     1g 瓊脂                  14g

    磷酸二氫銨     1g 水                 1000ml

    （2）制法  除指示液和瓊脂外，取上述成分，混合，微溫使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為6.9±0.1，加入瓊脂，加熱溶脹，然后加入指示液，混勻，分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘，制成斜面。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌能否利用枸櫞酸鹽作為碳源和氮源而生長繁殖。

    方法和結(jié)果觀察：取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基的斜面上，一般培養(yǎng)48~72小時，凡能在培養(yǎng)基斜面生長出菌落，培養(yǎng)基即由綠色變成藍(lán)色者為陽性反應(yīng)；無菌落生長，培養(yǎng)基仍綠色者為陰性反應(yīng)，陰性反應(yīng)者應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)觀察至7天。

    13.硝酸鹽胨水培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨    10g     硝酸鉀     2g

    酵母浸出粉   3g     水     1000ml

    （2）制法  取上述成分，加熱溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.3±0,1,分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘。

    （3）用途  用于鑒別細(xì)菌能否還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。方法和結(jié)果觀察：取待檢菌培養(yǎng)物接種于硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)24小時。將下列甲液和乙液于用前等量混合，每個培養(yǎng)物加混合物0.1ml，產(chǎn)生紅色為陽性反應(yīng)，不產(chǎn)生紅色為陰性反應(yīng)。

    甲液：稱取α-萘胺5g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。

    乙液：稱取磺胺酸（對氨基苯磺酸）8g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。

    14.石蕊牛奶培養(yǎng)基

    （1）成分

    脫脂奶粉      10g     水    100ml

    10%石蕊溶液 0.65ml

    （2）制法  取上述成分混勻后，分裝于小試管中，116℃滅菌10分鐘。

    （3）用途  用于檢查細(xì)菌對牛奶的凝固和發(fā)酵作用。

    15.半固體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

    （1）成分

    蛋白胨   10g   瓊脂     4g

    牛肉浸出粉  3g   水   1000ml

    氯化鈉    5g

    （2）制法  除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫使溶解，調(diào)pH值使滅菌后為7.2±0.2,再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝于小管中，121℃滅菌15分鐘后，直立放置。待凝固后備用。

    （3）用途  用于觀察細(xì)菌的動力，也可用于一般菌種的保存。

    細(xì)菌動力檢查：取疑似菌斜面培養(yǎng)物穿刺接種于半固體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，置35℃培養(yǎng)24小時，細(xì)菌沿穿刺外周擴散生長，為動力陽性；否則為陰性。陰性者，應(yīng)再繼續(xù)培養(yǎng)觀察2~3天。