細(xì)胞:EMT6細(xì)胞
中文名稱:小鼠乳腺癌細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:L15+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請嚴(yán)格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。
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成年生物體內(nèi)有多種體細(xì)胞,例如血液細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、免疫細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等等,它們形態(tài)各異,具有不同的功能。干細(xì)胞則是未成熟的細(xì)胞,可發(fā)育成為體細(xì)胞。
如果把體細(xì)胞比喻成具有一技之長的“專門人才”。
干細(xì)胞:可以通過學(xué)習(xí)發(fā)展成才的“潛在人才”,可以分化成體細(xì)胞。分化一旦完成,體細(xì)胞的“職業(yè)”就確定了。
胚胎干細(xì)胞:具有廣泛的發(fā)展?jié)摿?,可以分化成所有不同種類的體細(xì)胞。就像剛出生的嬰兒,雖然沒有任何專門才能,但未來有著無限的可能,長大后具體成為什么領(lǐng)域的人才取決于培養(yǎng)過程。
由于胚胎干細(xì)胞是“全功能”的干細(xì)胞,僅從技術(shù)角度來說,用胚胎干細(xì)胞來培養(yǎng)人體組織和器官以治療疾病是理想的。但胚胎干細(xì)胞要從胚胎中提取,因此進(jìn)行得不太順利。
成年動物體內(nèi)也擁有一些干細(xì)胞,稱為成體干細(xì)胞。它們具有一定的分化潛力,但分化方向比較固定,比如造血干細(xì)胞通常只發(fā)展成血液細(xì)胞。成體干細(xì)胞就像已經(jīng)接受過大量專業(yè)訓(xùn)練的學(xué)生,一般只會發(fā)展成特定領(lǐng)域的人才。
成體干細(xì)胞其分化能力有限。雖然曾成功改變成體干細(xì)胞的分化方向,但總的來說,“跨專業(yè)發(fā)展”對成體干細(xì)胞是相當(dāng)困難的。
以往認(rèn)為,細(xì)胞的克隆潛力與其分化潛力有關(guān),胚胎干細(xì)胞克隆潛力最高,體細(xì)胞低,而成體干細(xì)胞介乎兩者中間。用分化的體細(xì)胞克隆出小鼠,同時也證明了體細(xì)胞克隆潛力比成體干細(xì)胞更高,這一成果對于克隆和干細(xì)胞研究有重要意義。