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ELISA實驗誤差如何操作?

閱讀:95發(fā)布時間:2017-8-16

  對于ELISA實驗,科研人員zui怕的就是有誤差,我們能做的就是在可控的范圍內(nèi),減少ELISA實驗誤差,才是實驗要點。在ELISA實驗操作中,誤差有誤差,一個個小小的誤差導致zui終實驗存在*的數(shù)據(jù)差距,那么如何縮小實驗誤差?下面隨著金益柏一起來看看需要注意的:

ELISA實驗成功與否關鍵在于減少實驗誤差



  1、科研工作者應該具備從事實驗室操作的實驗經(jīng)驗和操作經(jīng)驗,對于實驗儀器、器械都很熟悉,而且具備總結和分析問題的能力,能夠及時處理實驗過程中出現(xiàn)的意外。


  2、使用校對過的微量移液器,排除因為設置錯誤導致的誤差。


  3、仔細閱讀elisa說明書,嚴格按照說明書來操作,不要混用不同批號的試劑,對于不能確定的,需要反復實驗并總結進行改進。


  4、洗滌*,洗滌不干凈,會導致假陽性,洗滌液也要新鮮,要現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可以出現(xiàn)假陽性。


  5、嚴格控制反應時間,反應時間比較長,酶失去活性;反應時間短的話,酶結合物不能和血清中的微生物抗原抗體充分結合,生成物機構松散不牢固,容易洗掉,都可以造成假陰性。


  6、注意試劑盒的保存期,過期的試劑盒不能使用。


  7、評估試劑的實用性,試劑是否穩(wěn)定,準確率高低很重要,在試劑啟用前,應該對陰、陽對照品反復對照實驗,判定試劑符合要求后才能使用。


  8、嚴格掌握顯色時間,顯色時間短的話,加入終止液反應終止后,底物結合物量過少,容易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應判定為假陽性,這可能和試劑有關系,加顯色后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結果。


  9、加樣需要準確快速,如果加樣不準確,酶生成的量不能確定,直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。


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