應(yīng)用EXCEL繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線及計算樣品濃度

 在ELISA實驗結(jié)束后，我們得到的是經(jīng)酶標(biāo)儀得出的標(biāo)準(zhǔn)品以及樣本的OD值。其中，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度已知，我們可以利用標(biāo)準(zhǔn)品的OD值及其相對應(yīng)的濃度，以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并用公式表示出來。這樣，我們把樣本的OD值以X值代入，便可求出Y值，即樣本濃度。          

 下面我們就一步步來實現(xiàn)這個目標(biāo)：

1、首先，將數(shù)據(jù)整理好輸入Excel，分別為經(jīng)酶標(biāo)儀讀出標(biāo)準(zhǔn)品的OD值及其對應(yīng)的濃度值。  

           2、拖動鼠標(biāo)選取完成的數(shù)據(jù)區(qū)，并點擊圖表向?qū)?，在圖表類型中選“XY散點圖”，并選擇子圖表類型的“散點圖”（*個沒有連線的），如下圖所示。

          3、點擊“下一步”，出現(xiàn)如下圖界面。如是輸入是如本例橫向列表的就不用更改，如果是縱向列表就改選“列”。

          在做ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過此曲線求樣本濃度時，因樣本OD值是已知的，因此我們需要將OD值設(shè)為X。根據(jù)上圖我們可以看到，橫坐標(biāo)X值為OD值，縱坐標(biāo)Y為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，這正是我們想要的。

          有時需要我們手動選擇X值，這時可以點擊“系列”來更改，如下圖。

         如果要對橫坐標(biāo)和縱坐標(biāo)進行調(diào)換，我們可以就點擊X值和Y值文本框右邊的小圖標(biāo)，結(jié)果如下圖：

          出現(xiàn)上圖后，拖動鼠標(biāo)選取正確的數(shù)據(jù)區(qū)域以調(diào)整X或Y。

          5、調(diào)好之后，然后點擊“下一步”出現(xiàn)圖標(biāo)選項界面，如下圖。

         6、點擊“下一步”，在彈出的窗口再點擊“完成”，現(xiàn)在一張帶標(biāo)準(zhǔn)值的完整散點圖就已經(jīng)完成，如下圖。

          7、到了這一步，散點圖便完成了。我們可能會問，曲線在哪里啊？

其實很簡單，先點擊圖上的標(biāo)準(zhǔn)值點（記住一定要點選上），然后單擊右鍵，點擊“添加趨勢線”。彈出趨勢線類型選擇對話框，有線性，對數(shù)，多項等選項，如下圖：

           8、在選擇之前，我們先對上圖做一下肉眼觀察，如果那些點能連成一條直線，或接近直線，我們就選擇“線性”，意思就是出來的趨勢線是一條直線，相應(yīng)的該直線的方程就是y=ax
+b的形式。不過一般的ELISA都不會是所有的標(biāo)準(zhǔn)點呈*的線性關(guān)系的，也就是說不是一條*的直線，這時我們可以選擇“多項式”，多項式后面還有“階數(shù)”的選擇，也就是說求出來的方程是幾次方，我們一般選“2階”，即出來的方程為y=ax²+bx+c. 選擇完畢后，彈出以下窗口。

          9、趨勢線也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線在此便顯示出來了。接下來我們需要將公式顯示出來，以根據(jù)樣本的OD值計算其濃度值。在鼠標(biāo)點選該線（一定要選中，選中后出現(xiàn)下圖的樣子即線由很多店標(biāo)識出來），單擊鼠標(biāo)右鍵，選擇趨勢線格式。我們在彈出的窗口中選擇“選項”選項卡，出現(xiàn)下圖，我們選擇顯示公式，顯示R方，即相關(guān)系數(shù)，這時公式與R方值便都顯示出來了。

我們將樣本的OD值作為X代入上述方程，求出來的便為濃度值了。

一般ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)要達(dá)到0.95以上，本例中為0.9999，非常不錯的曲線，這樣就保證了由該曲線及其方程求出的樣本濃度具有很強的可信性。