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細(xì)菌的人工培養(yǎng)

時(shí)間:2018-2-5閱讀:1219
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人工培養(yǎng)細(xì)菌是根據(jù)細(xì)菌的生理需求和繁殖規(guī)律,用人工方法提供給細(xì)菌所需的各種條件下培養(yǎng)細(xì)菌。這對(duì)細(xì)菌感染性疾病的診治及生物制品的研制等具有重要意義。

一、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基時(shí)人工培植的適合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的營養(yǎng)物制品,培養(yǎng)基的PH值一般為7.2-7.6,經(jīng)滅菌后才能使用。根據(jù)培養(yǎng)基用途不同可將培養(yǎng)基分為以下幾種:

(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基:含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì),zui常用的是肉湯培養(yǎng)基,即在牛肉浸液中加入適量的蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽、調(diào)節(jié)PH值為7.2-7.6,經(jīng)滅菌處理后可供大多數(shù)細(xì)菌培養(yǎng)用。

(2)營養(yǎng)培養(yǎng)基:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液、血清、酵母浸液等營養(yǎng)物質(zhì),供營養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長(zhǎng)。

(3)選擇培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)化學(xué)物質(zhì),以抑制某些細(xì)菌生長(zhǎng),而有利于另一類細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖,從而將后者從混雜的細(xì)菌群眾選擇分離出來。如SS瓊脂培養(yǎng)基中的膽鹽、煌綠等可疑值革蘭陽性菌和大腸埃希菌,從而可以從糞便中分離出沙門菌和志賀菌。

(4)鑒別培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入特定的單糖和氨基酸作為底物和相應(yīng)的指示劑,觀察細(xì)菌再次培養(yǎng)基中是否能分解這些糖或氨基酸產(chǎn)生不同物質(zhì),從而鑒別細(xì)菌,如伊紅*培養(yǎng)基、糖發(fā)酵管等。

(5)厭氧培養(yǎng)基:厭氧菌的分離培養(yǎng)和鑒定用的培養(yǎng)基。例如,在培養(yǎng)基中加入肉渣等還原劑的苞肉培養(yǎng)基,并用液狀石蠟或凡士林封口,隔絕空氣,使培養(yǎng)基內(nèi)稱為無氧環(huán)境。

根據(jù)培養(yǎng)基物理性狀不同可將其分為液體、半固體和固體培養(yǎng)基三大類。液體培養(yǎng)基常用語細(xì)菌的增菌培養(yǎng)和細(xì)菌的鑒定;在液體培養(yǎng)基中加入0.2%-0.5%的瓊脂即制成半固體培養(yǎng)基,常用語保存菌種及細(xì)菌動(dòng)力觀察;若加入2%-3%的瓊脂即制成固體培養(yǎng)基,常用語分離細(xì)菌和保存菌種。

二、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象

(一)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象

細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中可呈三種生長(zhǎng)狀態(tài):①渾濁生長(zhǎng):大多數(shù)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)后呈均勻渾濁狀態(tài),如葡萄球菌。②沉淀生長(zhǎng):少數(shù)呈鏈狀生長(zhǎng)的細(xì)菌或粗糙型細(xì)菌在液體培養(yǎng)基底部形成沉淀,培養(yǎng)液較清,如鏈球菌。③菌膜生長(zhǎng):專性需氧性細(xì)菌在液體培養(yǎng)基表面形成菌膜,如枯草桿菌。臨床用的澄清透明的注射液如果發(fā)現(xiàn)上述任何一種現(xiàn)象,均表明已被細(xì)菌污染,禁止使用。

(二)細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象

半固體培養(yǎng)基瓊脂含量少而較軟,有鞭毛的細(xì)菌可沿著穿刺線向四周擴(kuò)散,呈羽毛狀或云霧狀渾濁生長(zhǎng);無鞭毛的細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基上只能延穿刺線呈明顯的現(xiàn)狀生長(zhǎng),周圍培養(yǎng)基基本透明澄清。常用于細(xì)菌動(dòng)力觀察。

(三)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)現(xiàn)象

細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上課形成菌落或菌苔。吧細(xì)菌劃線接種到固體培養(yǎng)基表面,一般經(jīng)過37℃18-24h培養(yǎng),單個(gè)細(xì)菌就可以生長(zhǎng)繁殖呈肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán),稱為菌落(Colony)。不同的細(xì)菌形成的菌落大小、形狀、顏色、透明度、表面光滑或粗糙、邊緣整齊及溶血情況各有差異,其特征可以作為細(xì)菌鑒別的中藥依據(jù)。菌落一般分為兩種類型①光滑型菌落:表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊。②粗糙型菌落:表面粗糙、干燥、邊緣不整齊。講一個(gè)菌落挑取移種到另一個(gè)培養(yǎng)基中,生長(zhǎng)出來的細(xì)菌為純種,稱為純培養(yǎng),用于細(xì)菌的鑒定。許多菌落融合在一起形成菌苔(lawn)。

三、人工培養(yǎng)細(xì)菌的試劑意義

(一)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

1、病原菌的細(xì)菌學(xué)研究 在進(jìn)行病原菌的細(xì)菌學(xué)研究時(shí),必須首先經(jīng)純培養(yǎng)得到初中細(xì)菌才能作為研究的材料。

2、感染性疾病的病原學(xué)診斷和治療 對(duì)患者標(biāo)本中分離并將定出病原菌是診斷感染性疾病的zui可靠指標(biāo),病原菌的藥物敏感試驗(yàn)對(duì)臨床選擇有效的抗生素治療具有指導(dǎo)意義。

3、生物制品的制備 人工分離培養(yǎng)所得的純細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物,可制備疫苗、類毒素、診斷出標(biāo)準(zhǔn)菌液、或經(jīng)類毒素、純細(xì)菌免疫動(dòng)物后制備抗毒素、及診斷血清、用于傳染性疾病的診斷、預(yù)防劑治療

(二)其他方面的應(yīng)用

    利用細(xì)菌的培養(yǎng)和發(fā)酵,可提純精制的抗生素、維生素醇類、醬油、未經(jīng)等產(chǎn)品,還可用于是由脫蠟,污水處理,制造菌肥等。利用細(xì)菌繁殖快、以培養(yǎng)的特點(diǎn),可將細(xì)菌作為基因受體細(xì)胞,如將人或動(dòng)物細(xì)胞中編碼胰島素的基因從組到質(zhì)粒上,再倒入大腸埃希菌,就能從大腸埃希菌的培養(yǎng)液中獲得大量基因工程胰島素。

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