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閱讀：267發(fā)布時(shí)間：2017-4-20
內(nèi)參蛋白抗體
內(nèi)參（Internal Control）是指試驗(yàn)系統(tǒng)的內(nèi)部參照，一般對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來說是指由看家基因（house keeping gene）編碼表達(dá)的蛋白，他們?cè)诟鞣N不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)都相對(duì)恒定，在實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)蛋白表達(dá)水平時(shí)，常常選來作為參照物。上節(jié)我們介紹了三種常用胞漿的內(nèi)參蛋白（肌動(dòng)蛋白，β-Actin；β-球管蛋白，β-Tubulin；甘油醛-3-磷酸脫氫酶，GAPDH），這一節(jié)我們將會(huì)介紹其他幾種內(nèi)參蛋白。
Na/k泵通道蛋白（Na+/K+-ATPase），即Na+/K+-ATP酶，是一種整合膜蛋白。其由1023個(gè)氨基酸組成，分子量為113KD。用WB方法檢測(cè)一種膜蛋白的表達(dá)時(shí)，多選用Na+/K+-ATPase作為內(nèi)參。如果還在為WB實(shí)驗(yàn)中膜蛋白檢測(cè)的內(nèi)參選擇煩惱，推薦可以試試制備的Na+/K+-ATPase內(nèi)參抗體。
細(xì)胞色素c氧化酶 IV(COX IV)是一種異源寡聚酶，通常含有13個(gè)亞基，定位于線粒體內(nèi)膜，是線粒體呼吸鏈的酶復(fù)合物。由于在線粒體外膜和質(zhì)膜上都有COX IV，COX IV抗體常用作檢測(cè)線粒體蛋白的內(nèi)參抗體，其分子量為16kD左右。
PCNA即增殖細(xì)胞核抗原，因其只存在于正常增殖細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞內(nèi)而得名，以后的研究發(fā)現(xiàn)PCNA與細(xì)胞DNA合成關(guān)系密切，在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用，是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的良好指標(biāo)。在細(xì)胞核內(nèi)合成，并存在于細(xì)胞核內(nèi)，其由261個(gè)氨基酸組成，分子量為36KD。制備的PCNA抗體可以作為研究增殖細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞的內(nèi)參抗體。WB檢測(cè)多種細(xì)胞，PCNA均有表達(dá)，見圖1。但是PCNA對(duì)于非增殖細(xì)胞或經(jīng)過抗增殖處理的細(xì)胞并不是一個(gè)好的內(nèi)參。
Lamin B即核纖層蛋白B, 是凋亡關(guān)鍵因素Caspase家族的作用靶子，受Caspase 的剪切而活化，位于核膜。其由586個(gè)氨基酸組成，分子量為66KD。由于核纖層蛋白B在物種間的高度保守性，常常被選用做內(nèi)參。當(dāng)WB的目的蛋白為核蛋白時(shí)，可選用制備的Lamin B內(nèi)參抗體PAF548Mi01。但是對(duì)于沒有核被膜的樣品核纖層蛋白B是不適合的。在凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí)，Lamin B也不適合作為內(nèi)參。
組蛋白Histone H3.1由于是染色體的組成型表達(dá)組分，表達(dá)比較穩(wěn)定，經(jīng)常被作為zui廣泛的核內(nèi)參使用。組蛋白是和DNA等核酸組合在一起形成核蛋白，換句話，核蛋白組成成分是組蛋白，也非常保守，不會(huì)因?yàn)槭艿教幚矶淖?，所以用于作為?nèi)參。 組蛋白Histone H3.1由136個(gè)氨基酸組成，分子量為15KD。已成功制備的組蛋白Histone H3.1抗體PAA285Mi01，可作為研究核蛋白的內(nèi)參抗體。
在選用內(nèi)參時(shí)，需綜合考慮樣本種屬來源，目的蛋白分子量和目的蛋白表達(dá)部位以及實(shí)驗(yàn)環(huán)境，選擇合適的內(nèi)參，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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