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所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:顧經(jīng)理 (銷售經(jīng)理)

公司動態(tài)

ELISA實(shí)驗(yàn)的前期準(zhǔn)備工作

閱讀:338發(fā)布時(shí)間:2017-10-17

ELISA實(shí)驗(yàn)的前期準(zhǔn)備工作

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)開端前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品制作時(shí),均需充分混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)猜測樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的查看規(guī)劃,核算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
反應(yīng)時(shí)間的控制:參與底物后請守時(shí)查詢反應(yīng)孔的顏色改變(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆皡⑴c中止液中止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)然后影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
棄去液體,甩干,不必洗刷。每孔加查看溶液A工作液100 (臨用前制作),酶標(biāo)板加上覆膜,37 溫育1小時(shí)。
棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
ELISA試劑盒加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?100 ,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 ,留心不要有氣泡,加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,悄然晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時(shí)。為確保實(shí)驗(yàn)效果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請運(yùn)用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
每孔加查看溶液B工作液(臨用前制作)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時(shí)。
棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,辦法同進(jìn)程3。
每孔加底物溶液90 ,酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯時(shí),即可中止)。
每孔加中止溶液50 ,中止反應(yīng),此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。中止液的參與次第應(yīng)盡量與底物液的參與次第相同。
ELISA試劑盒當(dāng)即用酶標(biāo)儀在450nm波長丈量各孔的光密度(值)。


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