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江蘇菲亞生物科技有限公司
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瘦素elisa試劑盒操作技巧及操作注意事項(xiàng)
2018-5-24 閱讀(1640)
瘦素elisa試劑盒應(yīng)用于雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人瘦素（leptin）水平。用純化的人瘦素（leptin）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入瘦素（leptin），再與HRP標(biāo)記的瘦素（leptin）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素（leptin）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人瘦素（leptin）濃度。
瘦素elisa試劑盒操作技巧：
1、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
3、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、脫鎂葉綠素a氧化酶酶免ELISA試劑盒保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
瘦素elisa試劑盒操作注意事項(xiàng)
1、當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
3、一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
5、如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6、底物請(qǐng)避光保存。
7、在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
