磺胺類藥物的危害及檢測目的
磺胺類藥物是指在結(jié)構(gòu)上具有對氨基苯磺酰胺的一類化合物的總稱，主要適用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的化學(xué)廣譜抗菌藥，種類繁多，應(yīng)用廣泛。磺胺類藥物是應(yīng)用較早的一類人工合成抗菌藥，也是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥較大殘留*(GB31650-2019)中規(guī)定允許使用的一類藥物。但是允許使用不代表濫用，任何藥物的不當(dāng)使用都可能導(dǎo)致動物可食部分藥物富集，磺胺類藥物的廣泛使用同樣帶來了這個問題?；前奉愃幬餁埩魰θ梭w產(chǎn)生泌尿系統(tǒng)損害及肝損害、造血系統(tǒng)損害、過敏、細(xì)菌耐藥性等危害，對人體健康造成威脅。
本文闡述了如何將磺胺類藥物從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據(jù)國標(biāo)GB/T21316-2007，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。
檢測項目：磺胺類藥物
應(yīng)用范圍：食品/動物源性食品/肝、腎、肌肉、水產(chǎn)品和牛奶等
方法原理：試樣中加入C18填料后研磨均勻，用乙腈-水在微波輻照輔助下進(jìn)行提取，乙腈飽和正己烷液液分配凈化。液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。
前處理儀器：高速組織搗碎機；均質(zhì)器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；氮吹儀；渦旋混勻器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；真空泵；移液器1mL，,2mL；棕色雞心瓶150mL；樣品瓶2mL，帶聚四氟乙烯旋蓋；大號玻璃研缽；pH計，測量精度±0.2；離心機；棕色分液漏斗100mL；具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管50mL；超純水儀；微波爐，家用，帶有光波模式，功率700W；超聲波發(fā)生器。
檢測儀器：LC-MS/MS+ESI源
試樣制備
1、肌肉、內(nèi)臟、魚和蝦
從原始樣品中取出代表性樣品，經(jīng)高速組織搗碎機均勻搗碎，用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，分別裝入清潔容器內(nèi)，加封后作出標(biāo)記，一份作為試樣，一份作為留樣。將試樣于-20℃保存。
2、腸衣
從原始樣品中取出代表性樣品，用剪刀剪成4mm2的碎片，用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內(nèi)，加封后作出標(biāo)記，一份作為試樣，一份作為留樣。將試樣于-20℃保存。
3、牛奶
從原始樣品中取出代表性樣品，用組織搗碎機充分混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈容器內(nèi)，加封后作出標(biāo)記，一份作為試樣，一份作為留樣。將試樣于4℃避光保存。
前處理方法
1、提取
肌肉、內(nèi)臟、魚、蝦和腸衣
稱取2g(精確至0.01g)試樣置于玻璃研缽中，再稱取約6g(精確至0.01g)C18填料(40μm)加至試樣上用玻璃杵輕輕研磨，使樣品與填料混合均勻(色澤均一，狀態(tài)分散)，裝于50mL具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管中，加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液，旋渦振蕩1min，放入家用微波爐中在光波模式下微波輻照30s，3000r/min離心5min，將乙腈層移入100mL棕色分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入25mL乙腈搖勻，微波輔助提取30s，3000r/min離心5min，合并乙腈提取液，待凈化。
牛奶
取2g(精確至0.01g)牛奶，置于玻璃研缽中，加入6g(精確至0.01g)硅藻土，另加入6g(精確至0.01g)C18填料，用玻璃杵輕輕研磨30s，使樣品與填料混合均勻(色澤均一，狀態(tài)分散)，裝于50mL具螺旋蓋聚四氟乙烯試管中，加入25mL乙腈-水(100:3V/V)溶液，旋渦振蕩1min，放入家用微波爐中在光波模式下微波輻照30s，于3000r/min離心5min，將乙腈層移入100mL棕色分液漏斗中。離心后的沉淀物再加入25mL乙腈搖勻，微波輔助提取30s，于3000r/min離心5min，合并乙腈提取液，待凈化。
2、凈化
提取液中加入25mL乙腈飽和正己烷溶液，振搖5min，將底層乙腈溶液移入150mL棕色雞心瓶中，加入10mL正丙醇，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45℃水浴中減壓蒸發(fā)至近干，氮氣流吹干。準(zhǔn)確加入1mL乙腈-水(1:1V/V)溶液，超聲30s溶解殘渣，將溶解液移入10mL棕色離心管中，加0.5mL乙腈飽和正己烷，渦旋振蕩2min，于3000r/min離心5min，棄去正己烷溶液，取底層乙腈-水溶液過0.22μm微孔濾膜，供高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定。
注意事項
1、因為磺胺類藥物在光照下容易分解，其標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液需要避光存放，使用棕色試劑瓶保存。濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液可在-20℃避光存放12個月。
2、該國標(biāo)方法采用二次提取沉淀物的方式提高回收率。
3、提取液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時控制好溫度和轉(zhuǎn)速，防止爆沸，隨時觀察，至近干時及時停止取出雞心瓶。
4、由于該國標(biāo)方法沒有使用相對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)來校正回收率，建議使用相應(yīng)的空白樣品基質(zhì)提取液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
