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單克隆抗體和多克隆抗體性質(zhì)上的區(qū)別
2023-4-20 閱讀(157)
機(jī)體受抗原刺激后，由淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞(主要是B淋巴細(xì)胞分化后的漿細(xì)胞)產(chǎn)生具有特異性免疫功能球蛋白，即抗體。抗原物質(zhì)上能刺激B淋巴細(xì)胞的結(jié)構(gòu)部位叫做抗原決定簇，一個(gè)抗原具備多個(gè)抗原決定簇，只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系，即一種克隆，由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。機(jī)體受到抗原的刺激往往會(huì)針對(duì)抗原的多個(gè)抗原決定簇相應(yīng)的產(chǎn)生多克隆抗體，多克隆抗體能與抗原的多處抗原決定簇結(jié)合。由一種漿細(xì)胞克隆產(chǎn)生的特異性結(jié)合抗原單一抗原決定簇的抗體即為單克隆抗體。多克隆抗體可以看作是多種單克隆抗體的混合物。抗體是我們實(shí)驗(yàn)中zui 常用到的一種物質(zhì)之一，抗體主要是分為單克隆抗體和多克隆抗體兩大類，單克隆抗體和多克隆抗體性質(zhì)上的區(qū)別:
1、特異性
多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合，它們有的特異性高，有的特異性低，總體特異性符合正態(tài)分布曲線的形式，而其特異性的總體表現(xiàn)也應(yīng)處于統(tǒng)計(jì)學(xué)正態(tài)曲線中位線（MID）的水平。而單抗制備后續(xù)的篩選過(guò)程，可去除大部分的非特異抗體，保留幾株特異性較好的單克隆抗體。
一般而言，單克隆抗體的確具有更高的特異性。
多抗特異性可通過(guò)生產(chǎn)環(huán)節(jié)比如使用高純度的免疫原，以及使用提純的靶點(diǎn)蛋白對(duì)多抗進(jìn)行免疫親和層析純化等方法得以改進(jìn)。經(jīng)過(guò)免疫親和層析的多抗其總體特異性將大大提升，與單抗相比已相差無(wú)幾。
2、關(guān)于假陽(yáng)性
根據(jù)抗體最核心的表位結(jié)合區(qū)域—互補(bǔ)決定區(qū)（Complementarity Determining Region，CDR）的結(jié)構(gòu)，抗體通常可以緊密結(jié)合的抗原表面區(qū)域或表位面積很小，對(duì)于變性的肽段約在4-8個(gè)Aa以內(nèi)，以及5-7個(gè)單糖的糖鏈或6-8個(gè)核苷酸的核酸。通過(guò)肽段BLAST可以得知，小肽段序列wan全相同的情況將在很多不同蛋白上發(fā)生。這意味著單抗識(shí)別的這個(gè)表位可能并不僅僅屬于靶標(biāo)蛋白本身，也即意味著，即使利用純化抗原蛋白進(jìn)行了特異性篩選的單克隆抗體，當(dāng)用其檢測(cè)復(fù)雜樣本時(shí)，也將面臨交叉反應(yīng)或假陽(yáng)性問(wèn)題。
3、靈敏度
特異性決定了假陽(yáng)性結(jié)果的多少，敏感性決定了檢出率的高低。在復(fù)雜樣本中，由于多克隆抗體識(shí)別抗原的多個(gè)表位，可以在一個(gè)抗原分子上結(jié)合更多的抗體分子，也可以在當(dāng)部分抗原表位受到一定程度的遮蓋或破壞時(shí)，仍有抗體結(jié)合在未受影響的表位上。這種情況常發(fā)生在如石蠟包埋的免疫組化（IHC-P）等實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)樣本經(jīng)甲醛交聯(lián)固定后，即使經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)，抗原表位也不可避免地受到了影響，此時(shí)單克隆抗體由于只識(shí)別一個(gè)表位，結(jié)合能力可能大大降低甚至呈現(xiàn)陰性結(jié)果，而只要不是所有表位都受到了破壞，多抗仍可以獲得該靶點(diǎn)的陽(yáng)性結(jié)果。同樣的，對(duì)于樣本中一些表達(dá)豐度極低的蛋白，由于多表位結(jié)合更多抗體分子，檢測(cè)信號(hào)就將被放大。因此，使用多抗具有靈敏度和檢出率上的優(yōu)勢(shì)。
