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更新時間：2018-06-08 15:59:39瀏覽次數(shù)：344次
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TRIzol伴侶TRIzol是美國Invitrogen公司的、用于總RNA提取（主要是動物總RNA提?。┑闹a(chǎn)品，具有廣大的客戶群。但其缺點之一是一直沒有柱式升級產(chǎn)品，客戶仍然要使用既繁瑣又費(fèi)事的非柱式操作（另一缺點是不能用于富含多糖和多酚的材料）。為解決此問題，我們特推出本產(chǎn)品，其主要特點是：
1. 跟TRIzol結(jié)合使用，把經(jīng)典操作變成了柱式操作，簡化了實驗流程，用戶可以節(jié)約30分鐘的時間。
TRIzol伴侶
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
TRIzol伴侶 | 50次 | 690元 |
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TRIzol是美國Invitrogen公司的、用于總RNA提?。ㄖ饕莿游锟俁NA提?。┑闹a(chǎn)品，具有廣大的客戶群。但其缺點之一是一直沒有柱式升級產(chǎn)品，客戶仍然要使用既繁瑣又費(fèi)事的非柱式操作（另一缺點是不能用于富含多糖和多酚的材料）。為解決此問題，我們特推出本產(chǎn)品，其主要特點是：
1. 跟TRIzol結(jié)合使用，把經(jīng)典操作變成了柱式操作，簡化了實驗流程，用戶可以節(jié)約30分鐘的時間。
2. RNA質(zhì)量更好，因為操作簡短減少了RNA在提取過程中的降解。
3. RNA純度更高，OD260/OD280一般在1.9以上，比經(jīng)典TRIzol法得到的更純。
4. 專門的洗滌條件能有效去除基因組DNA，進(jìn)一步減少其對RNA的污染
5. 適用于其他基于酸酚/異硫氰酸胍提取原理的RNA提取產(chǎn)品，包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent等。
6. 可以省略處理步驟，避免接觸有毒試劑(但效果稍差)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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