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即用型藍白T載體B型（T7-T3,有MCS）

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更新時間：2018-06-13 16:18:26瀏覽次數(shù)：280次

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產(chǎn)品簡介

即用型藍白T載體B型（T7-T3,有MCS）本產(chǎn)品是用XcmI酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5'都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶（如Taq DNA聚合酶）擴增得到的PCR片段。
1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為100%，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉(zhuǎn)移酶在平末端載體加尾得到的T載體。

詳細介紹

即用型藍白T載體B型（T7-T3,有MCS）

名稱	規(guī)格	價格	手冊
即用型藍白T載體B型（T7-T3,有MCS）	20次	詢價

本產(chǎn)品是用XcmI酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5'都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶（如Taq DNA聚合酶）擴增得到的PCR片段。

1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為100%，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉(zhuǎn)移酶在平末端載體加尾得到的T載體。

2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。

3. 插入位點兩側(cè)有對稱的EcoRI酶切位點，便于對克隆的PCR片段進行近一步的分析。

4. 來源于pBlueScript ⅡSK（+），故克隆位點兩側(cè)分別有T7和T3 RNA聚合酶啟動子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。

5. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。

6. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α 肽編碼區(qū)內(nèi)，可以進行藍白斑篩選。

7. 含有絲狀噬菌體f1 復(fù)制起始子，可以制備單鏈DNA。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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