克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液是LMAI Bio推出的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的革命性產(chǎn)品，它能使各種常態(tài)的E.coli細(xì)胞直接用于快速轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，使廣大用戶(hù)不再因?yàn)楹?jiǎn)單的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)而再為感受態(tài)細(xì)胞的制備，保存和運(yùn)輸?shù)确爆嵉氖虑槎傩模蟠蟮乜s短了基因克隆實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，提高使用者的工作效率。
1. 不需專(zhuān)門(mén)制備感受態(tài)細(xì)胞，直接使用常態(tài)的細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，隨用隨配，十分方便。常態(tài)細(xì)胞包括新鮮培養(yǎng)的菌液，新

詳細(xì)介紹

克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液

名稱(chēng)	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
克必隆常態(tài)轉(zhuǎn)化液	20次	詢(xún)價(jià)

是LMAI Bio新推出的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的革命性產(chǎn)品，它能使各種常態(tài)的E.coli細(xì)胞直接用于快速轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，使廣大用戶(hù)不再因?yàn)楹?jiǎn)單的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)而再為感受態(tài)細(xì)胞的制備，保存和運(yùn)輸?shù)确爆嵉氖虑槎傩模蟠蟮乜s短了基因克隆實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，提高使用者的工作效率。

1. 不需專(zhuān)門(mén)制備感受態(tài)細(xì)胞，直接使用常態(tài)的細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，隨用隨配，十分方便。常態(tài)細(xì)胞包括新鮮培養(yǎng)的菌液，新鮮的或4℃放置數(shù)月的培養(yǎng)基菌落，甘油菌種保存液等。

2. 適用菌種和質(zhì)粒廣泛，用過(guò)的E.coli菌種包括K12系的DH5α和Tg1，B系的BL21（DE3）。用過(guò)的質(zhì)粒有pGEM，pET和克必隆系列等。

3. 轉(zhuǎn)化效率適中，使用10 ng質(zhì)粒轉(zhuǎn)化一般能得到上萬(wàn)個(gè)轉(zhuǎn)化子）效率在105到106 CFU/μg質(zhì)粒之間），使用3-5 μL連接液轉(zhuǎn)化一般能得幾千個(gè)轉(zhuǎn)化子，足夠篩選重組子使用（但不適合構(gòu)建文庫(kù)）。

4. 單管快速操作，整個(gè)操作可以在一個(gè)1.5 mL塑料離心管中進(jìn)行，短可以在三十分鐘內(nèi)完成，不需要過(guò)夜細(xì)菌培養(yǎng)，熱休克處理甚至恒溫?fù)u床，極其適用于自動(dòng)化的大規(guī)?？寺『Y選工作。

5. 穩(wěn)定性好，本可以在-20℃條件下長(zhǎng)期保存而不用擔(dān)心轉(zhuǎn)化效率的降低，而感受態(tài)細(xì)胞在同樣條件下會(huì)迅速失去活性。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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