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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-19 15:16:14瀏覽次數(shù)：325次
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天凈沙甲基化PCR 2.0試劑盒本產(chǎn)品是甲基化專一性PCR試劑盒（CAT#:100923）的升級版，其亞硫酸氫鹽DNA修飾試劑盒（CAT#:100922）的升級版，亞硫酸氫鹽修飾DNA時要求DNA必須在單鏈狀態(tài)，反應還必須在低溫進行，常規(guī)的修飾試劑盒由于是在液相進行，要在低溫下讓DNA不相互復性而保持單鏈狀態(tài)非常棘手，所以常規(guī)修飾試劑盒的修飾效率一般都不高。此外，常規(guī)方法要切換反應液，有多次沉淀步
天凈沙甲基化PCR 2.0試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
天凈沙甲基化PCR 2.0試劑盒 | 150次 | 詢價 |
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本產(chǎn)品是甲基化專一性PCR試劑盒（CAT#:100923）的升級版，其亞硫酸氫鹽DNA修飾試劑盒（CAT#:100922）的升級版，亞硫酸氫鹽修飾DNA時要求DNA必須在單鏈狀態(tài)，反應還必須在低溫進行，常規(guī)的修飾試劑盒由于是在液相進行，要在低溫下讓DNA不相互復性而保持單鏈狀態(tài)非常棘手，所以常規(guī)修飾試劑盒的修飾效率一般都不高。此外，常規(guī)方法要切換反應液，有多次沉淀步驟，使得DNA的回收率一般都不超過50%。為克服這些缺點，本公司開發(fā)出了此升級產(chǎn)品，它具有下列特點：
1． 用包埋的樣品進行所有操作，免去所有沉淀和純化步驟，極大簡化了操作。
2． 免去了DNA提取過程，所需實驗材料比常規(guī)方法更少，少幾個細胞都可以，極大地節(jié)約了寶貴材料，尤其適用于*材料。
3． 包埋處理后，DNA在整個操作過程中都處于適于修飾的單鏈狀態(tài)，極大提高了修飾效率。
4． DNA包埋于包埋塊中，切換反應液非常方便，而且DNA不會丟失，所以終回收率都在90%以上。
5． 適用于實體材料、懸浮細胞和純化好的DNA樣品。
6． 本試劑盒提供的甲基化修飾試劑盒足夠制備150多個10uL包埋塊（如果用純化好的DNA）或25個10uL包埋塊（如果用懸浮細胞）；本試劑盒提供的PCR試劑盒足夠180次100uL體系的PCR反應。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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