細(xì)節(jié)決定成敗，這關(guān)于試驗(yàn)室科研工作者來(lái)說(shuō)也是如此。在ELISA試劑盒試驗(yàn)中的各項(xiàng)操作細(xì)節(jié)有許多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，加樣時(shí)由低濃度向高濃度加，因?yàn)檫@樣能夠減少跳孔的幾率。而整個(gè)試驗(yàn)的*后關(guān)鍵就是成果的處理辦法了，那么在在今天的技術(shù)文章中，為您帶來(lái)的是ELISA試劑盒檢測(cè)成果分析辦法。
①：ELISA試驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
②：均勻OD值減去空白孔的OD值。
③：制作規(guī)范曲線。
如果出現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對(duì)照孔的OD值不同很大)，或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，或許引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能盡快進(jìn)行下一步操作、增加樣品或其它試劑時(shí)操作的辦法不對(duì)、孵育位置避光性欠安或蓋板膜沒(méi)有密封好使得水分蒸騰、酶標(biāo)板孔問(wèn)參加的試劑量不同，相對(duì)應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請(qǐng)當(dāng)心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請(qǐng)當(dāng)心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、ELISA試劑盒在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、增加試劑時(shí)請(qǐng)懸空滴入，牢記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、運(yùn)用已校正過(guò)的微量加樣器，如將次參加液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以確保參加液體體積的一致性。
以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，ELISA試劑盒運(yùn)用作圖軟件得出一個(gè)適宜的計(jì)算辦法。主張運(yùn)用適宜的軟件來(lái)作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條*適宜的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實(shí)際濃度很挨近(+/-10%)。選擇擬合度的那條曲線。
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