為了保證所測得的ELISA結(jié)果準(zhǔn)確，操作在實(shí)驗(yàn)的過程中需要對常見問題及復(fù)雜步驟做足功課，掌握了各個步驟的隱患之后，再去實(shí)驗(yàn)就會容易的多。其中，上海通蔚生物特別說明這些ELISA試劑盒步驟等您重點(diǎn)優(yōu)化：
一、ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化
在這一過程中，一般情況下有三次加樣，它們分別是加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝固、收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。
二、ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化
1.包被液的選擇：一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
2.包被濃度的選擇：包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，ELISA試劑盒要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。
3.包被溫度的選擇：通常是4-8度條件下放置一個晚上或者37度保溫2小時，我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。
4.包被抗原的選擇：可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)，比如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。
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