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閱讀:281發(fā)布時(shí)間:2020-2-20
經(jīng)歷了天然培育基、組成培育基后,無(wú)血清培育基和無(wú)血清培育成為當(dāng)今細(xì)胞培育領(lǐng)域的一大趨勢(shì)。采用無(wú)血清培育可下降出產(chǎn)成本,簡(jiǎn)化別離純化步驟,防止病毒污染造成的損害。
無(wú)血清培育基是不需求增加血清就可以保持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間成長(zhǎng)繁殖的組成培育基??墒撬鼈兓蛟S包含單個(gè)蛋白或很多蛋白組分。
盡管基礎(chǔ)培育基加少數(shù)血清所配制的*培育基可以滿足大部分細(xì)胞培育的要求,但對(duì)有些試驗(yàn)卻不合適,如調(diào)查一種成長(zhǎng)因子對(duì)某種細(xì)胞的效果,這時(shí)需求掃除其他成長(zhǎng)因子的干擾效果。
而血清中或許含有各種成長(zhǎng)因子;又如需求測(cè)定某種細(xì)胞在培育過(guò)程中排泄某種物質(zhì)的能力;或者要大規(guī)模的培育某種細(xì)胞,以獲得它們的排泄產(chǎn)物。因而研制出無(wú)血清培育基一直是生物科學(xué)工作者努力的方針。
無(wú)血清培育基的ji本配fang為基本成分為基礎(chǔ)培育基及增加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗出產(chǎn)的細(xì)胞在體外培育時(shí),大都呈貼壁成長(zhǎng)或兼性貼壁成長(zhǎng);
而當(dāng)其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培育基中成長(zhǎng)時(shí),由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式成長(zhǎng)。
增加組分包含以下幾大類物質(zhì):
(1)促貼壁物質(zhì):許多細(xì)胞必須貼壁才能成長(zhǎng),這種情況下無(wú)血清培育基中一定要增加促貼壁和擴(kuò)展因子,一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。
它們?nèi)允侵匾姆至阉匾约氨3终<?xì)胞功能的分解因子,對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分解,起著重要效果。纖連蛋白主要促進(jìn)來(lái)自中胚層細(xì)胞的貼壁與分解,這些細(xì)胞包含成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。
(2)促成長(zhǎng)因子及激素:針對(duì)不同細(xì)胞增加不同的成長(zhǎng)因子。激素也是刺激細(xì)胞成長(zhǎng)、保持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞*的,如胰島素。
(3)酶抑制劑:培育貼壁成長(zhǎng)的細(xì)胞,需求用*消化傳代,在無(wú)血清培育基中*須含酶抑制劑,以終止酶的消化效果,達(dá)到維護(hù)細(xì)胞的意圖。*常用的是大豆*;抑制劑。
(4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見(jiàn)如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的增加比較大,可增加培育基的粘度,維護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損害。許多旋轉(zhuǎn)式培育的無(wú)血清培育基都含有牛血清白蛋白。
(5)微量元素:硒是zui常見(jiàn)的。
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