我司在ELISA中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反響的完成需求有一定的溫度和時刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時機(jī)，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)擴(kuò)散才干達(dá)到反響的終點(diǎn)。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反響總是需求一定時刻的溫育。
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反響動力學(xué)研討時，試驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達(dá)高峰。
為加快反響，可提高反響的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜選用更高的溫度?？乖贵w反響4℃更為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過一夜，以構(gòu)成zui多的沉淀。但因所需時刻太長，在ELISA中一般不予選用。
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底應(yīng)貼著水面，使溫度迅速平衡。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi)，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui后將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能迅速平衡。
室溫溫育的反響，操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)則的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA板只要平置于操作臺上即可。應(yīng)注意溫育的溫度和時刻應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確。為確保這一點(diǎn)，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定。
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