| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
公司信息
| 參考價 | ￥1100-￥1820 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1100元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 1820元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-06-06 10:47:32瀏覽次數(shù)：364
聯(lián)系我們時請說明是環(huán)保在線上看到的信息，謝謝!
外切葡聚糖酶纖維二糖水解酶(CBH)微板法
外切葡聚糖酶纖維二糖水解酶(CBH)微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶（S-CBH）活性測定試劑盒說明書 (貨號：WS3230W 微板法 96 樣) 一、產品簡介： 土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶又稱土壤纖維二糖水解酶（CBH，EC 3.2.1.91）是土壤纖維素 酶系的組份之一，該酶作用于β-1,4-糖苷鍵，每次切下一個纖維二糖（還原糖）分子，本 試劑盒采用該酶催化對硝基苯基-β-D-纖維二糖苷生成黃色物質對-硝基*酚（PNP），該物 質在 405nm 有特征光吸收，進而得到土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶（S-CBH）活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 120mL×1 瓶 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×4 支 4℃保存 臨用前甩幾下使粉劑落入底部， 每支再加入 1.4mL 蒸餾水溶解， 4 度保存。 試劑三 液體 40mL×1 瓶 4℃保存 標準品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標曲，則用到該試劑。 三、所需儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、水浴鍋或恒溫振蕩培養(yǎng)箱、可調式移液器、蒸餾水。 四、土壤外切-β-1,4-葡聚糖酶活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或干土（風干或者 37 度烘箱風干），先粗研磨，過 40 目篩網備用。 【注】：土壤風干，減少土壤中水分對于實驗的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細膩； 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 405nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 空白管（僅做一次） 土樣（g） 0.1 0.1 試劑一 750 800 750 試劑二 50 50 充分混勻，37℃培養(yǎng) 2 小時（振蕩培養(yǎng)或間隔 20min 手動振蕩 混勻幾下） 試劑三 200 200 200 混勻，8000rpm 離心 5min（若上清液不澄清可加大離心力），取 200μL 上清液至 96 孔板中，405nm 下讀取吸光值 A，△A=A 測 定- A 對照-A 空白（每個樣本做一個自身對照）。 【注】：1.若ΔA 較小，可延長 37℃的孵育時間 T（如增至 4 小時或更長），或增加土樣質 量 W（如增至 0.3g）。則改變后的 T 和 W 需代入計算公式重新計算。 2.若測定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可縮短 37℃的孵育時間 T（如減至 0.5 小時或更短）， 或減少土樣質量 W（如減至 0.05g）。則改變后 T 和 W 需代入計算公式重新計算?；驅ψ?/span>本試劑盒僅供科研使用 2 后一步的待檢測上清液（包括測定管、對照管和空白管）同時用蒸餾水進行稀釋，稀釋倍 數(shù) D 代入計算公式。 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.0108x + 0.0053；x 為標準品摩爾質量（nmol），y 為△A。 2、單位定義：每小時每克土樣中產生 1nmol 對-硝基*酚（PNP）定義為一個酶活單位。 S-CBH 活力(nmol/h/g 土樣)=(ΔA-0.0053) ÷0.0108÷W÷T×D =46.3×(ΔA-0.0053)÷W×D T---反應時間，2h； W---土壤樣本實際取樣量，g； PNP 相對分子質量---139.11。 D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為 1。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（10μmol/mL）：向標準品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸餾水超聲溶解。 2 把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度：0, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2μmol/mL。也可根據(jù)實際樣本 來調整標準品濃度。 3 在 EP 管加入：50μL 標準品+750μL 試劑一+200μL 試劑三，混勻，取 200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下讀取吸光值，根據(jù)結果制作標準曲線。
