研究丨DSM Prionex®蛋白穩(wěn)定劑與BSA性能大PK

時(shí)間：2023-12-18閱讀：458

1、成分：高純度豬真皮膠原蛋白多肽溶液，不含防腐劑、添加劑和穩(wěn)定劑

2、制備工藝：豬皮膠原蛋白在弱酸條件下經(jīng)部分水解后，在145°C下經(jīng)1小時(shí)熱處理后，后通過0.2μm的膜進(jìn)行無菌過濾

3、特性：無酶活性也無已知的酶抑制劑活性，不含免疫反應(yīng)蛋白，不含脂質(zhì)、多糖或核酸

4、溶解性：易溶于水、稀釋的電解質(zhì)溶液、甘油、DMSO、濃度低于75%的乙醇、以及低于20%飽和度的硫酸銨溶液

5、熱穩(wěn)定性：不會(huì)凝膠化且具有熱穩(wěn)定性，在加熱滅菌過程中不會(huì)沉淀（在121°C下20分鐘）

保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定的思路

蛋白質(zhì)是免疫診斷產(chǎn)品開發(fā)的基礎(chǔ)，不管是作為原料的抗原抗體、或是大部分的待檢標(biāo)志物，都是蛋白質(zhì)。在體外診斷試劑研發(fā)中，試劑穩(wěn)定性是經(jīng)常困擾研發(fā)人員的一個(gè)大問題。試劑穩(wěn)定性的問題，很大程度可以歸結(jié)為如何在體外環(huán)境下維持蛋白質(zhì)天然結(jié)構(gòu)、防止蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)失活的問題。另外保證校準(zhǔn)質(zhì)控品的穩(wěn)定，也是獲得準(zhǔn)確測試結(jié)果的保證。我們通常使用以下方法來穩(wěn)定蛋白質(zhì)：

1、抑菌劑、防腐劑

2、pH值/離子強(qiáng)度

3、蛋白酶抑制劑

4、利用靜電作用防止聚集，如添加表面活性劑

5、添加抗氧化劑

6、加入氨基酸，調(diào)節(jié)溶解度

7、添加惰性化合物，如BSA、Blockmaster®、Prionex®

Prionex®的應(yīng)用

※ 蛋白質(zhì)/酶的穩(wěn)定劑

※ 蛋白質(zhì)凍干/熱處理的保護(hù)劑

※ ELISA等免疫檢測的封閉劑

應(yīng)用實(shí)例

儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)

在含2NIH-U/mlningxuemei的溶液中加分別入Prionex®和BSA，終濃度為1.0%，將溶液保持在37℃。通過檢測凝血時(shí)間測定ningxuemei活性，時(shí)間延長表示ningxuemei失活。

Prionex®能更有效地提高ningxuemei的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，可用于延長蛋白質(zhì)制劑的保質(zhì)期

熱穩(wěn)定性

在含有3BU/mlningxuemei樣巴曲酶的溶液中分別加入Prionex和BSA，終濃度為1.0%，并在沸水浴中加熱。通過檢測凝血時(shí)間測定巴曲酶活性，時(shí)間延長表示巴曲酶失活。

Prionex®對(duì)巴曲酶的酶活性有非常顯著的穩(wěn)定作用

吸附效應(yīng)

高度稀釋的蛋白質(zhì)溶液在處理過程中，通常因吸附效應(yīng)（比如被吸附在容器壁、膜、助濾劑或色譜介質(zhì)上）導(dǎo)致顯著的活性損失。

向含有20U/mlyidanbaimei和1.0%穩(wěn)定劑的溶液中加入10%的玻璃粉末。在室溫下?lián)u動(dòng)后（160rpm），使用顯色底物在405nm處比色測定yidanbaimei活性。

在防止蛋白質(zhì)吸附的應(yīng)用上，Prionex®與BSA有同等性能

冷凍干燥

冷凍干燥是長時(shí)間保存不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)方法，然而冷凍干燥過程非常復(fù)雜。如果方法和配方未充分優(yōu)化，會(huì)經(jīng)常發(fā)生物理和化學(xué)變化，導(dǎo)致蛋白變性。

將含有10μLNIH-U/mlningxuemei和10%穩(wěn)定劑的溶液凍干。復(fù)溶后，通過檢測凝血時(shí)間測定ningxuemei活性，時(shí)間延長表示ningxuemei失活。

在使用Prionex®冷凍干燥的樣品中未觀察到酶活性的降低，而含有BSA的樣品的活性有略微降低（參見上圖）。Prionex®不僅是一種有效的凍干保護(hù)劑，還可產(chǎn)生堅(jiān)固、易于溶解的凍干餅。

產(chǎn)品貨號(hào)

除了上述應(yīng)用實(shí)例外，Prionex®還被多家國際ZHIMING校準(zhǔn)質(zhì)控品供應(yīng)商大規(guī)模采用，并已經(jīng)在磁珠抗體偶聯(lián)物保存液、膠乳抗體偶聯(lián)物保存液、生化試劑等應(yīng)用中得到驗(yàn)證

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