瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體專題

什么情況下會選擇標簽抗體用于免疫沉淀呢？

當某些目標蛋白沒有對應的特異性抗體（eg.抗體所識別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽，無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適，所選抗體不能識別處于天然構象的蛋白）而無法進行免疫沉淀時，可以采用一個表位標記蛋白后，再選擇針對此表位的標簽抗體來進行免疫沉淀。

什么樣的標簽適合用于免疫沉淀呢？

Flag（DDDDK）標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多肽片斷。Flag標簽只有8個氨基酸組成，因此它不會占據其他表位與結合域，避免導致融合蛋白的功能、分泌性以及轉運發(fā)生改變。由于它的親水性特點，Flag標簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結合以及被腸激酶酶解。

Flag標簽系統是已被*的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統，廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。

為什么推薦使用Flag標簽抗體偶聯的瓊脂糖/磁珠？

與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統免疫沉淀（IP）方法相比，Abmart的瓊脂糖/磁珠偶聯標簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復合物結合的步驟。偶聯抗體直接和目標蛋白結合后，通過離心或使用磁力架，將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結合，降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。

§  看到這里，您肯定會問，Protein A/G的缺點是什么？

1.      耗時：使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作

1.      效果差：當抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時，ProteinA/G和抗體結合能力弱

2.      背景高：和樣本中的其他免疫球蛋白結合，產生非特異性結合，導致高背景

與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統免疫沉淀（IP）方法相比，Abmart的瓊脂糖/磁珠偶聯標簽抗體，省去了Protein A/G與抗原-抗體復合物結合的步驟。偶聯抗體直接和目標蛋白結合后，通過離心或使用磁力架，將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷，更可以避免非特異性結合，降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。

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