MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒為測(cè)定活細(xì)菌中的革蘭氏征兆提供了一種簡(jiǎn)便的方法。革蘭氏染色是臨床和研究環(huán)境中常用的將細(xì)菌種類分類為兩個(gè)大類的方法。不幸的是，傳統(tǒng)的革蘭氏染色法是乏味的并且涉及細(xì)菌固定，如果要進(jìn)一步表征細(xì)菌，則這可能是一個(gè)顯著的缺點(diǎn)。MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒為活細(xì)菌提供了一步法革蘭氏染色測(cè)定法，克服了傳統(tǒng)革蘭氏染色測(cè)定法固有的問(wèn)題。MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒利用兩種DNA染料MycoLight™Green和MycoLight™Red具有區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌的能力。MycoLight™Green對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和陰性細(xì)菌均染色，而MycoLight™Red則優(yōu)先標(biāo)記革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。這兩種染料的激發(fā)/發(fā)射zui大值對(duì)于MycoLight™綠色約為484/504 nm，對(duì)于MycoLight™紅色約為518/600 nm。因此，當(dāng)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物被染料染色時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，而革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽(yáng)性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過(guò)濾器熒光監(jiān)測(cè)。當(dāng)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物被染料染色時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，而革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽(yáng)性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過(guò)濾器熒光監(jiān)測(cè)。當(dāng)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌的混合物被染料染色時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌將發(fā)出紅色熒光，而革蘭氏陰性細(xì)菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽(yáng)性和陰性染色可以分別用TRITC和FITC過(guò)濾器熒光監(jiān)測(cè)。

平臺(tái)

組件

協(xié)議范例

乍看上去

協(xié)議摘要

1. 準(zhǔn)備細(xì)菌樣本
2. 準(zhǔn)備并將MycoLight™染料工作溶液添加到細(xì)菌樣品中
3. 在室溫下與MycoLight™染料工作溶液在黑暗中孵育15分鐘
4. 使用FITC和TRITC濾光片組通過(guò)熒光顯微鏡或熒光光譜分析樣品

重要說(shuō)明
使用前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊刑准M件。

準(zhǔn)備工作溶液

MycoLight™染料工作溶液：
在試管中混合等體積的MycoLight™綠色（組分A）和MycoLight™紅色（組分B），并充分混合。

程序

細(xì)菌樣品的制備

1. 準(zhǔn)備濃度約為10 ^7個(gè)細(xì)胞/ ml的細(xì)菌樣品。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中使細(xì)菌生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)后期。 注意：在波長(zhǎng)= 600 nm（OD600）處測(cè)量細(xì)菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細(xì)胞數(shù)。對(duì)于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 10 ⁸細(xì)胞/ ml。
    
2. 通過(guò)以10,000 xg離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重懸于ddH ₂ O中，將細(xì)菌濃度調(diào)節(jié)至?10 ⁷細(xì)胞/ ml。

染色方案

1. 向100 µL細(xì)菌懸液中加入2 µL MycoLight™染料工作溶液。
    
2. 充分混合并在室溫下于黑暗中孵育15分鐘。
    
3. 用熒光顯微鏡通過(guò)FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監(jiān)測(cè)革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)菌熒光，并通過(guò)TRITC（Ex / Em = 540/620 nm）通道監(jiān)測(cè)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)菌熒光。 注意：該協(xié)議僅提供指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)不同的細(xì)菌菌株或其他特定需求進(jìn)行優(yōu)化。 注意：該試劑盒中的革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的相對(duì)比例也可以通過(guò)熒光光譜法估算。圖中包含樣本分析。

光譜

打開(kāi)：高級(jí)頻譜查看器

2003004005006007008009000102030405060708090100Wavelength (nm)Normalized Intensity (%)

光標(biāo)位置

圖片

圖1.用MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭氏染色試劑盒對(duì)大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混合物進(jìn)行染色。紅色和橙色：革蘭氏陽(yáng)性枯草芽孢桿菌細(xì)胞；綠色：革蘭氏陰性大腸桿菌細(xì)胞。 22413 MycoLight™快速熒光細(xì)菌革蘭染色試劑盒 MycoLight™ Rapid Fluorescence Bacterial Gram Stain Kit 100 Tests 22415 MycoLight™快速熒光革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌染色試劑盒 MycoLight™ Rapid Fluorescence Gram-Positive Bacteria Staining Kit 100 Tests 22420 MycoLight™快速比色微生物活力檢測(cè)試劑盒 MycoLight™ Rapid Colorimetric Microbial Viability Assay Kit   22500 Cell Explorer™固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 *藍(lán)色熒光，在405nm激發(fā)* Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Blue Fluorescence with 405 nm Excitation* 200 Tests 22501 Cell Explorer™固定化死細(xì)胞標(biāo)記試劑盒 *綠色熒光，在405nm激發(fā)* Cell Explorer™ Fixable Dead Cell Staining Kit *Green Fluorescence with 405 nm Excitation* 200 Tests

圖2.  制備了各種比例的  大腸桿菌  和  芽孢桿菌。1 mL細(xì)菌懸液用4μL染料工作溶液染色。用Cary Eclipse熒光分光光度計(jì)（A）測(cè)量熒光發(fā)射光譜（激發(fā)470 nm，發(fā)射480-700 nm），獲得綠色（490-510 nm）和紅色（590-610）的積分強(qiáng)度，綠色計(jì)算每種細(xì)菌懸浮液的λ/紅色比。 繪制了革蘭