我們的Cell Meter 磷脂酰*凋亡檢測(cè)試劑盒 是一套用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活性的試劑盒。有多種參數(shù)可用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力。Cell Meter 磷脂酰*凋亡檢測(cè)試劑盒 旨在通過(guò)測(cè)量磷脂酰絲an酸（PS）的轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞凋亡中，PS轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外部小葉。磷脂酰絲an酸在細(xì)胞表面的出現(xiàn)是細(xì)胞凋亡的初始/中間階段的通用指標(biāo)，可以在觀察形態(tài)變化之前進(jìn)行檢測(cè)。該特定試劑盒旨在通過(guò)測(cè)量磷脂酰絲an酸（PS）的轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞凋亡。該試劑盒使用我們專(zhuān)有的基于熒光小分子的Apopxin™PS探針，該探針以比膜聯(lián)蛋白V（Kd<10 nM）高得多的親和力特異性結(jié)合PS。與膜PS結(jié)合后具有藍(lán)色熒光。它可以以酶標(biāo)儀，顯微鏡和流式細(xì)胞儀的形式使用，而大多數(shù)其他商業(yè)凋亡檢測(cè)試劑盒只能與顯微鏡或流式細(xì)胞儀平臺(tái)一起使用。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.用測(cè)試化合物制備細(xì)胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
2.加入等量的Apopxin™Violet 450工作溶液
3.在室溫下孵育1小時(shí)
4.觀察Ex / Em = 405/450 nm（截止= 420 nm）的熒光強(qiáng)度（底部讀取模式）或使用裝有紫羅蘭色濾光片的熒光顯微鏡

溶液配制

工作溶液配制

將10μL100X Apopxin™紫羅蘭色450（組分A）添加到1 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Apopxin™紫羅蘭色450工作溶液。

操作步驟

1.通過(guò)向PBS或所需的緩沖液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X測(cè)試化合物儲(chǔ)備溶液來(lái)處理細(xì)胞。對(duì)于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基），添加相同量的化合物緩沖液。

2.將細(xì)胞板在5％CO2、37°C的培養(yǎng)箱中孵育所需的時(shí)間（對(duì)于用星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞需要4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)凋亡。注意：由于在405 nm激發(fā)時(shí)，從380至490 nm的寬發(fā)射光譜，某些化合物（例如喜shu堿）可能會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。

3.在每個(gè)孔中添加100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin™Violet 450工作溶液。

4.在避光條件下，于室溫下孵育細(xì)胞板至少1小時(shí)。

5.以800 rpm的速度離心細(xì)胞板（特別是非粘附細(xì)胞）2分鐘（制動(dòng)）。

6.使用熒光酶標(biāo)儀（底部讀取模式）在Ex / Em = 405/450 nm（截止= 420 nm）或使用帶有紫色濾光片的熒光顯微鏡對(duì)圖像池進(jìn)行熒光強(qiáng)度監(jiān)測(cè)。