樣品實驗方案

簡要概述

1.用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制備細胞
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時
4.監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加（截止= 515 nm）

工作溶液配制

將50μLCaspase8底物（組分A）加入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspasae 8工作液不穩(wěn)定，請及時使用。有關(guān)細胞樣品制備的指南，請點擊查看。

操作步驟

1.通過將10μL/孔的10X測試化合物（96孔板）或5μL/孔的5X測試化合物（384孔板）加入PBS或所需緩沖液中來處理細胞。對于空白孔（沒有細胞的培養(yǎng)基），加入相同量的化合物緩沖液。

2.將細胞板在5％CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時間（對于用喜*堿或星形孢菌素處理的Jurkat細胞，4-6小時）以誘導細胞凋亡。

3.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 8工作溶液。

4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時，避光。注意：如果需要，在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前，向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認對caspase 8樣活性的抑制作用。

5.以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘（制動關(guān)閉）。

6.用熒光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下監(jiān)測熒光增加。