MycoLight 活細菌熒光成像試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測細菌的試劑盒，該活細菌熒光成像套件提供了一種簡便方法，可通過熒光顯微鏡可視化活細菌。 MycoLight 520是一種非熒光酯酶底物，可擴散到革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌中。 通過細菌細胞內(nèi)非特異性酯酶水解后，會產(chǎn)生綠色熒光產(chǎn)物，并在細菌內(nèi)積累。 與常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比，該試劑盒可提供更明亮，更穩(wěn)定的信號，具有更低的背景和更容易的染色方案。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的MycoLight 活細菌熒光成像試劑盒。

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備100X染料儲備溶液
2.準備細菌樣品
3.添加MycoLight 520
4.將細菌樣品與MycoLight 520信號增強劑在黑暗中于37°C孵育5-10分鐘或在室溫下孵育60分鐘
5.通過帶有FITC濾光片組的熒光顯微鏡分析樣品

溶液配制

1.儲備溶液配制

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1MycoLight 520儲備液（100X）：
將100 uL DMSO（組分D）添加到MycoLight 520（組分A）小瓶中，制成100X儲備液。

樣品示例及操作

1.準備細菌樣品，濃度范圍為106到108個細胞/ ml。在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中使細菌生長到對數(shù)后期。通過以10,000 x g離心10分鐘除去培養(yǎng)基，然后將沉淀重新懸浮在測定緩沖液（組分C）中。注意：在波長= 600 nm（OD600）處測量細菌培養(yǎng)物的光密度，以確定細胞數(shù)。對于大腸桿菌培養(yǎng)，OD600 = 1.0等于8 x 108細胞/ ml。

2.根據(jù)需要用測試化合物處理細胞。通過以10,000 x g離心10分鐘來去除處理液，然后將沉淀物重新懸浮在適量的測定緩沖液（組分C）中，以使處理過的樣品中細菌的濃度與活菌濃度相同。注意：開始治療之前，請確定細菌培養(yǎng)物的濃度。注意：死細菌可以作為陰性對照，建議使用70％乙醇殺死細菌30分鐘，然后煮沸60分鐘。

3.將1 µL 100X MycoLight 520儲備液和10 µL 10X Signal Enhancer（組分B）加到90 µL的測定緩沖液細菌樣品中。

4.充分混合并在黑暗中于37°C孵育5-10分鐘，或在室溫孵育60分鐘，以獲得佳染色效果。

5.使用熒光顯微鏡通過FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監(jiān)控細菌的熒光。注意：相同的方案也可用于酶標儀檢測。