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ELISA競爭抑制法普遍存在的操作問題

時(shí)間：2012/3/11閱讀：1099
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兩對半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測，而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。

 
而競爭抑制法的原理：酶標(biāo)抗體與樣本抗體在同樣的體系中，與固相抗原競爭結(jié)合是等比關(guān)系。原論上講，應(yīng)該先將樣本與酶標(biāo)抗體先行混勻，然后加入反應(yīng)也進(jìn)行。但實(shí)際工作中并非如此，都是分開加入反應(yīng)孔。這樣會(huì)造成先加入的先結(jié)合，與后加入者并不是公平的關(guān)系，因而也不符合等比原則。特別是在放置時(shí)間長，且溫度高的情況下，對結(jié)果有很大的影響。
 
第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院對此造成的影響進(jìn)行了研究。將陰性標(biāo)本94份并用生理鹽水進(jìn)行1：30稀釋，在加入標(biāo)本后按下表時(shí)間放置后再加入酶標(biāo)抗體，然后檢測結(jié)果如下：
 

放置時(shí)間（min）
陰性標(biāo)本數(shù)
臨界值－標(biāo)本A450nm值
假陽性率（%）
<0.3
0.3~0.7
>0.7
0
75
10
3
6
0
2
68
13
7
6
7.4
5
65
15
8
6
10.6
10
56
16
12
10
20.2
20
38
18
17
21
39.3
30
21
12
18
43
57.4


從上表可以看出，如果同時(shí)加入標(biāo)本與酶標(biāo)抗體，沒出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標(biāo)抗體，由于標(biāo)本比酶標(biāo)抗體先結(jié)合了兩分鐘，因此出現(xiàn)了7.4%的假陽性。30分鐘后再加，假陽性高達(dá)57.4%。因此建議競爭抑制法的項(xiàng)目，加十個(gè)樣本后立即加酶標(biāo)抗體，這樣對檢測結(jié)果沒有影響。
 

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