豬圓環(huán)病毒（2 型）抗體檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
一、用途
豬圓環(huán)2 型病毒（Porcine circovirus type 2,PCV2）抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)豬血清中的圓
環(huán)2 型病毒抗體，評(píng)估養(yǎng)豬場(chǎng)PCV 疫苗免疫狀況及感染豬的血清學(xué)輔助診斷。
二、原理
本試劑盒采用間接ELISA 法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被純化的圓環(huán)2 型病毒抗原。在試驗(yàn)中，
加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過(guò)溫育后，若樣品中含有PCV 特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，
經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與檢測(cè)板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異
性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB 底物液，經(jīng)酶催化形成藍(lán)色產(chǎn)物，加
入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm 波長(zhǎng)測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A 值。
三、試劑盒組成
1、PCV 抗原預(yù)包被板條 1 塊 7、終止液 6ml
2、酶結(jié)合物 12ml 8、陰性對(duì)照 800μl
3、10 倍濃縮洗滌液 50ml 9、陽(yáng)性對(duì)照 800μl
4、底物A 液 6ml 10、血清稀釋板 1 塊
5、底物B 液 6ml 11、封板膜 2 張
6、樣本稀釋液 50ml 12、說(shuō)明書(shū) 1 份
四、使用單位需自備的設(shè)備及試劑
1、微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。
2、一次性移液器吸頭。
3、量筒：500ml。
4、96 孔板酶標(biāo)儀。
5、蒸餾水或去離子水。
6、洗瓶或洗板機(jī)。
五、樣品制備
取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血。
六、洗滌液的準(zhǔn)備
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子
水作10 倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
七、樣品的稀釋
在血清稀釋板中按1：101 的體積比稀釋待檢血清（例如：200μl 樣品稀釋液中加2μl 待檢血清）。
注意：陰性和陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。取每個(gè)樣品后都要更換吸頭，準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣品在板上的位
置。每個(gè)樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。
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八、注意事項(xiàng)
1、試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2～8℃。
2、不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3、底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
4、TMB（底物B 液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5、檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水（未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2～
8℃）。
6、所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7、嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得的結(jié)果。操作過(guò)程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過(guò)程必須精
確。
8、血清稀釋板為一次性用品，不得重復(fù)使用；血清稀釋板的zui大容量為400μl/孔。
九、操作步驟
1、取預(yù)包被的檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少，可拆開(kāi)分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl
加入到檢測(cè)板孔中。同時(shí)設(shè)陰性、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1 孔，取陰性及陽(yáng)性對(duì)照各100μl
分別加入反應(yīng)孔中，空白對(duì)照僅加入100μl 樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），
蓋上封板膜，置37℃溫育30 分鐘。
2、小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗3 次。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl），
靜置1 分鐘后甩掉。洗滌3 次后在干凈吸水紙上拍干。
3、每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30 分鐘。
4、小心揭開(kāi)封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌3 次, 方法同2。切記zui后在干凈吸水紙上拍干。
5、每孔先加底物A 液50μl、再加底物B 液50μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10 分鐘。
6、每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10 分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
十、結(jié)果判定
以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm 作參比波長(zhǎng)）讀取吸光度A 值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)
性對(duì)照孔A450 值大于或等于0.4，陰性對(duì)照孔A450 值必須小于0.1。如果試驗(yàn)無(wú)效，試驗(yàn)中的操
作值得懷疑，試驗(yàn)應(yīng)重做，并仔細(xì)檢察各組分。
樣品 A450 值大于0.25+陰性對(duì)照孔均值，判為陽(yáng)性；樣品A450 值小于0.25+陰性對(duì)照孔均值，
判為陰性；如陰性對(duì)照孔均值小于0.05 按0.05 計(jì)算。
十一、貯存條件及有效期
2～8℃避光保存，有效期6 個(gè)月。