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KOD -Plus-系列酶（TOYOBO）KOD-201

特征2.　通過熱啟動提高了PCR反應(yīng)效率
通過將2種抗KOD單克隆抗體預(yù)混在酶中，抑制了PCR反應(yīng)前常溫狀態(tài)下的多聚酶活性和
3'→5'核酸外切酶活性（該活性是產(chǎn)生非特異性反應(yīng)的主要原因）?？贵w在PCR的zui初變
性步驟即發(fā)生失活，對擴(kuò)增反應(yīng)沒有任何影響。
特征3.　延伸性?擴(kuò)增效率的提高
對反應(yīng)Buffer的組成進(jìn)行了*化的重組，使之較以往的KOD DNA polymerase延伸性?擴(kuò)
增效率均有很大的提高。

特征4.　超群的耐熱性
因其耐熱性比Taq DNA Polymerase更為優(yōu)良，故可以將熱變性步驟的溫度設(shè)定值提高，對
GC-rich等容易形成高級結(jié)構(gòu)的目的片段尤其適用。

特征5.　高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】
對難擴(kuò)增的目的片段、長目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外，也降低了帶入的
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液對PCR反應(yīng)的抑制。

＜幾點建議＞

●PCR產(chǎn)物的克隆

由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，可用平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。此時，如已對載體進(jìn)行了脫磷酸化處理，就需要對PCR產(chǎn)物進(jìn)行磷酸化，或使用帶5'磷酸基的引物?！×硗?，由于本酶的PCR產(chǎn)物已被平滑化，不能直接進(jìn)行TA克隆?？墒褂冒匆韵路椒ㄩ_發(fā)的TA克隆試劑盒「TArget Clone -Plus-」。

●PCR條件的設(shè)定

酶的標(biāo)準(zhǔn)使用量為50μl反應(yīng)體系1U。延伸反應(yīng)在68℃條件下進(jìn)行，按1kb目的片段1min.的標(biāo)準(zhǔn)。出現(xiàn)拖尾條帶時，可降低MgSO₄濃度，無法確認(rèn)到擴(kuò)增時，可提高MgSO₄濃度。

●GC-rich模板的情況

在反應(yīng)液中添加終濃度為2?5%的DMSO可得到改善。

●以RT反應(yīng)液為模板的情況

過量帶入RT反應(yīng)液有可能會對PCR反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用。建議帶入到PCR的RT反應(yīng)液在PCR反應(yīng)液的1/25以下（在1/50以下）。這樣就無需考慮RT反應(yīng)液中Mg²⁺、dNTPs的影響，只要按照基本反應(yīng)條件添加本酶中添付的dNTPs和MgSO₄即可。

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