肽和雙縮脲反應(yīng)

基于銅的蛋白的檢測，包括BCA和洛瑞方法，取決于上的公知的“縮二脲反應(yīng)”，由此含有三個或更多個氨基酸殘基的肽形成一個著色螯合物配合物與二價銅離子（Cu2 +的）中的堿性環(huán)境中含有鈉酒石酸鉀。這成為雙縮脲反應(yīng)為已知的，因為它是一個復(fù)雜的化學(xué)性質(zhì)相似的形式與有機(jī)化合物的縮二脲（NH 2-CO-NH-CO-NH 2）和二價銅離子。 過剩的脲和熱的產(chǎn)物，縮二脲，與銅的反應(yīng)以形成光的藍(lán)色的四配位配合物。

圖雙縮脲反應(yīng)。通過減少銅亞銅形式的銅離子，反應(yīng)產(chǎn)生一種淡淡的藍(lán)紫色。
 結(jié)構(gòu)的尿素，縮二脲和肽。由于多肽具有相似的結(jié)構(gòu)，以縮二脲，它們是能夠由縮二脲反應(yīng)與銅的絡(luò)合物。
單氨基酸和二肽不給雙縮脲反應(yīng)，但三肽和多肽或蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，生成藍(lán)紫色絡(luò)合物，在540nm處吸收光的光。一個銅離子形成配位絡(luò)合物，四到六附近肽債券的著色。產(chǎn)生的顏色的強(qiáng)度是參與反應(yīng)的肽鍵的數(shù)目成正比。因此，雙縮脲反應(yīng)，是一個簡單的和快速的相同名稱的用于定量測定總蛋白濃度的比色試劑的基礎(chǔ)。的縮二脲測定的工作范圍是5-160mg/mL，這對于某些類型的工業(yè)應(yīng)用是足夠的，但幾乎沒有足夠敏感的大部分蛋白質(zhì)的研究需要。