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技術(shù)文章

胰島素放免試劑盒說明書

閱讀：250發(fā)布時(shí)間：2012-9-8

胰島素*說明書碘[¹²⁵I]

【藥品名稱】

通用名稱：碘[¹²⁵I]胰島素*

英文名稱：Iodine[¹²⁵I]Insulin Radioimmunoassay Kit

漢語拼音：Dian [¹²⁵I]Yidaosu Fangshemianyifenxi Yaohe

【成分】

規(guī)格成分	100管	50管	制品狀態(tài)
Ins.標(biāo)準(zhǔn)品（S₁～S₅）	5瓶	5瓶	凍干品
¹²⁵I-Ins.（紅色）	1瓶	1瓶	凍干品
Ins.緩沖液	1瓶/40ml	1瓶/40ml	液體
豚抗-Ins.抗體（藍(lán)色）	1瓶	1瓶	凍干品
驢抗豚免疫分離劑	1瓶/50ml	1瓶/25ml	液體
Ins.質(zhì)控血清	2瓶	2瓶	凍干品

【性狀】液體組分（免疫分離劑除外）應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物；凍干組分應(yīng)成疏松狀，復(fù)溶后應(yīng)無沉淀或絮狀物。

【放射性核素半衰期】本品所用核素為碘[125I]，其物理半衰期（T½）為60天。

【臨床意義】

胰島素（Insulin,簡稱Ins.），是由胰島β細(xì)胞合成其前體，經(jīng)加工后分泌的蛋白質(zhì)激素，它由51個(gè)氨基酸組成α、β兩條肽鏈，通過兩個(gè)二硫鍵連結(jié)在一起，分子量為5734D。不同種屬動(dòng)物的胰島素與人胰島素結(jié)構(gòu)略有不同，豬胰島素結(jié)構(gòu)與人的zui相似，只是在β鏈上的zui后一個(gè)氨基酸不同，因此兩者在免疫分析中有明顯的交叉反應(yīng)。

胰島素是促進(jìn)合成的激素，主要作用是促進(jìn)葡萄糖的氧化和糖原生產(chǎn)，抑制糖原異生，從而維持血糖恒定。胰島素缺乏時(shí)，血糖濃度升高，可超過腎糖閾，發(fā)生依賴胰島素糖尿病。

本藥盒用于血清或血漿中胰島素含量的測定，主要用于對胰島β細(xì)胞的分泌功能和糖尿病的研究，確定糖尿病的類型；對胰島素瘤的診斷，探討冠心病機(jī)理，研究某些藥物對糖代謝的影響以及內(nèi)分泌紊亂疾病等都有一定的意義和價(jià)值。

【測定原理】

利用均相競爭抑制原理，采用平衡競爭法對血清或血漿進(jìn)行直接測定。標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的Ins.和標(biāo)記抗原共同與*的特異性抗體進(jìn)行競爭性免疫反應(yīng)。當(dāng)樣品中Ins.濃度較高時(shí)，與抗體結(jié)合的標(biāo)記抗原就少，反之，亦然。用免疫分離劑分離出抗原-抗體復(fù)合物，并測定結(jié)合物中的放射性。因標(biāo)記抗原的結(jié)合量與樣品中Ins.呈一定的函數(shù)關(guān)系。因此，通過數(shù)學(xué)處理就能計(jì)算出樣品中的Ins.濃度。

【適用儀器】適用于各類ν-*。

【樣本要求】

取靜脈血分離血清，待測；血漿則需加入抗凝劑，混勻，分離血漿后，待測；如不立即測量，可將樣品密封后，置于2～8℃或-20℃儲(chǔ)存?zhèn)錅y，2～8℃保存不應(yīng)超過1周，-20℃保存不超過2個(gè)月。冰凍樣品在保存過程中應(yīng)避免反復(fù)凍融。冰凍樣品測定前，講樣品置于室溫或常溫水中融化，并充分搖勻。

【用法用量】

1 試劑配制、使用方法和保存

（1）Ins.標(biāo)準(zhǔn)品：凍干品，向每瓶標(biāo)準(zhǔn)品中準(zhǔn)確地加入1ml緩沖液溶解。溶解15分鐘后搖勻方可適用。溶解后各標(biāo)準(zhǔn)濃度值分別為5,15,45,135,405μIU/ml。標(biāo)準(zhǔn)復(fù)溶后2～8℃保存可穩(wěn)定42天，凍干品-20℃保存有效期內(nèi)穩(wěn)定。

（2）¹²⁵I-Ins.：凍干品，100管規(guī)格用10ml緩沖液溶解，50管規(guī)格用5ml緩沖液溶解。2～8℃保存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。如一次加樣超過100管，兩瓶混合后使用。100管標(biāo)記物放射性不大于111 KBq（3μCi）。

（3）豚抗-Ins.抗體：凍干品，用緩沖液溶解，每瓶抗體加6ml（如不填寫100T加10ml,50T加5ml緩沖液溶解）。抗體溶解后2～8℃保存可穩(wěn)定42天，凍干品-20℃保存有效期內(nèi)穩(wěn)定。

（4）驢抗豚免疫分離劑：液體，加樣前必須搖勻！2～8℃保存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。開封后42天內(nèi)穩(wěn)定。

（5）Ins.緩沖液：液體，2～8℃保存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。開封后42天內(nèi)穩(wěn)定。

（6）Ins.質(zhì)控血清：凍干品，使用前向每瓶質(zhì)控血清中準(zhǔn)確加入0.5ml蒸餾水溶解。復(fù)溶后2～8℃保存可穩(wěn)定42天，凍干品-20℃保存有效期內(nèi)穩(wěn)定。有效期及附值，詳見質(zhì)控血清適用說明書。

2 測定步驟

取圓底聚苯乙烯試管若干，用記號(hào)筆或特殊鉛筆編號(hào)NSB、S₀～S₅和待測樣品管等，然后用微量加樣器按下表加樣。加樣前所有試劑（尤其分離劑！）包括待測樣品要搖勻，并且平衡到室溫。

加樣程序表單位：μl

管別試劑	總T	NSB	S₀	S₁～S₅	待測樣品
Ins.緩沖液	—	200	100	—	—
Ins.標(biāo)準(zhǔn)品（S₁～S₅）	—	—	—	100	—
質(zhì)控或待測樣品	—	—	—	—	100
豚抗-Ins.抗體	—	—	100	100	100
¹²⁵I-Ins.	100	100	100	100	100
混勻，37℃溫育2小時(shí)。
驢抗豚免疫分離劑	—	500	500	500	500
充分搖勻，室溫放置15分鐘，3500轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，吸棄上清，測各沉淀管的放射性計(jì)數(shù)（cpm）。

3 數(shù)據(jù)處理

（1）聯(lián)機(jī)處理：由電腦自動(dòng)處理得出結(jié)果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，處理軟件也不一樣，用戶一定要使用適合的處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。在此建議用戶使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式。

（2）手工作圖或計(jì)算器處理：

1）. 百分結(jié)合率計(jì)算：設(shè)S₀管計(jì)數(shù)為B₀，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為B，非特異管計(jì)數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率計(jì)算公式為：B/ B₀=（B－NSB）/（ B₀－NSB）×100%

2）. logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式為：logit=ln（B/ B₀）/（1－B/ B₀）

3）. 手工作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的B/B₀為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直線）。根據(jù)待測樣品的B/B₀可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對數(shù)才是zui后的濃度值。

4）. 計(jì)算器處理：使用有線性擬合功能的計(jì)算器，可以比較方便地計(jì)算出樣品濃度值，具體操作方法請查閱計(jì)算器的使用說明書。

標(biāo)準(zhǔn)曲線舉例（僅供參考，不得用于實(shí)際計(jì)算）。濃度單位：μIU/ml

項(xiàng)目	NSB	0	5	15	45	135	405
濃度值（ng/ml）		0	0.25	0.5	1	3	6
百分結(jié)合率（%）	B/T	B/B₀
百分結(jié)合率（%）	2	80	87	73	51	28.2	12.8
logit-log 主要曲線參數(shù)	A=3.33 B=-2.01 R=-0.9999 ED75=12.93 ED50=45.62 ED25=161.01

【參考正常值】

空腹血清胰島素參考正常值：14.0±8.7μIU/ml，范圍5～25μIU/ml。

餐后血清C-P峰值約為空腹時(shí)的5倍，峰值一般出現(xiàn)在餐后30～60分鐘（與進(jìn)食食品種類有一定關(guān)系），3小時(shí)后接近空腹值。

單位換算：本批Ins.標(biāo)準(zhǔn)抗原，1mg=25IU

由于地區(qū)及使用儀器不同，所測的正常值會(huì)存在一定的差異，所以本說明書提供的正常值僅作參考，各實(shí)驗(yàn)室能建立符合本實(shí)驗(yàn)室要求的正常值范圍。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1. 測定范圍：5～405μIU/ml。

2. 靈敏度:2μIU/ml。

3. 精密度：批內(nèi)變異系數(shù)（CV）<10%；批間變異系數(shù)（CV）<15%。

4. 使用期限：見產(chǎn)品外包裝。

【禁忌】本品僅供體外科研實(shí)驗(yàn)用！

【注意事項(xiàng)】

1. 收到試劑盒后，盡快存放在2～8℃。

2. 使用前請?jiān)敿?xì)閱讀此說明書。

3. 不同藥盒或不同月份的同種藥盒的組分不得混用。

4. 吸棄上清液時(shí)，注意不得損失沉淀物，否則將明顯影響測定結(jié)果。

5. 當(dāng)樣品中Ins.濃度高于405μIU/ml時(shí)，可將樣品用緩沖液稀釋5-10倍后復(fù)測，測定濃度乘以稀釋倍數(shù)即為樣品的濃度。

6. 藥盒請?jiān)谟行趦?nèi)使用。

7. 臨床標(biāo)本均應(yīng)視為有潛在傳染性，請按傳染病實(shí)驗(yàn)室規(guī)程操作。

8. 使用本藥盒應(yīng)注意放射防護(hù)，放射性廢棄物須按放射防護(hù)條例規(guī)定處理。

9. 使用本品的操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)。

【孕婦及哺乳期婦女用藥】由于本品僅供體外診斷用，兒童不需接觸本品，所以對其健康無損害。

【貯藏】2～8℃保存。

【有效期】1個(gè)月。

胰島素*說明書碘[¹²⁵I]

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